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文檔簡介
1、目的:
煙酸受體GPR109A在很多組織和細(xì)胞中都被證明有抗炎活性。發(fā)現(xiàn)小鼠胰島β細(xì)胞及MIN6胰島β細(xì)胞株表達(dá)煙酸受體GPR109A,并且證明在MIN6細(xì)胞上,通過激活GPR109A可以抑制IFN-γ和TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)NO累積,由此推測(cè)GPR109A在β細(xì)胞上同樣也有抗炎活性。在這些研究基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)將利用棕櫚酸對(duì)MIN6細(xì)胞進(jìn)行炎癥誘導(dǎo)后,觀察 GPR109A的抗炎作用,并進(jìn)一步探索它的抗炎機(jī)制。并在原代小鼠胰島細(xì)胞
2、上初步探討是否存在著相同的抗炎機(jī)制。
方法:
培養(yǎng)MIN6細(xì)胞,通過RT-PCR及免疫細(xì)胞化學(xué)染色驗(yàn)證MIN6細(xì)胞上存在GPR109A的表達(dá)。分別予棕櫚酸及棕櫚酸+煙酸干預(yù),蛋白免疫印跡法(western blotting)檢測(cè)INF-γ及GPR109A的表達(dá)情況和Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化水平。為進(jìn)一步驗(yàn)證GPR109A與Akt/mTOR信號(hào)通路的關(guān)系,分別予不同濃度的煙酸和3-羥基丁酸干預(yù)MIN6細(xì)胞
3、,檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化水平。分離小鼠胰島,予煙酸和3-羥基丁酸干預(yù),熒光定量PCR分析mTOR、p70S6K的表達(dá)水平。
結(jié)果:
?、臡IN6細(xì)胞表達(dá)GPR109A mRNA。⑵MIN6細(xì)胞表達(dá)GPR109A蛋白。⑶煙酸可部分逆轉(zhuǎn)棕櫚酸誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞Akt和p70S6K的磷酸化和IFN-γ的表達(dá)。⑷煙酸抑制MIN6細(xì)胞內(nèi)Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化。⑸3-羥基丁酸抑制MIN6細(xì)
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