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文檔簡介
1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(OA)是一種常見的老年性退行性疾病,可以引起的關(guān)節(jié)軟骨退化損傷、關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生,影響關(guān)節(jié)功能。巨噬細(xì)胞作為機(jī)體的一種重要的免疫細(xì)胞,其促炎、促血管生成以及促組織修復(fù)功能,在OA的進(jìn)展中起到了一定的推動作用。本研究通過模擬巨噬細(xì)胞炎癥環(huán)境,并使用一種中草藥提取物木犀草素作用于巨噬細(xì)胞,通過觀察巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的變化,明確木犀草素對巨噬細(xì)胞炎癥及促血管生成因子相關(guān)表達(dá)的影響。
方法:培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)
2、胞系RAW264.7,實(shí)驗(yàn)分為空白組,Lps作用組,IL-4作用組,木犀草素處理組??瞻捉M無處理,Lps作用組采用Lps刺激巨噬細(xì)胞2h模擬炎癥環(huán)境,IL-4作用組采用IL-4刺激巨噬細(xì)胞2h誘導(dǎo)M2極化,木犀草素處理組則于不同作用組中加入木犀草素處理24h。通過real-time PCR、western blot以及免疫熒光技術(shù)觀察誘導(dǎo)組與處理組間炎癥因子TNF-α、iNOS、IL-1β、IL-6,促血管生成相關(guān)因子VEGF、HIF-
3、1α、PDGF、TF、TGF-β的表達(dá)變化。
結(jié)果:經(jīng)5μg·mL-1 Lps作用后,real-time PCR結(jié)果顯示5μg·mL-1 Lps組炎癥因子TNF-α、iNOS、IL-1β、IL6表達(dá)較空白組明顯升高(P<0.05),Luteolin60μmol·mL-1處理組較Lps作用組炎癥因子TNF-α、iNOS、IL-1β、IL-6表達(dá)明顯降低(P<0.05)。免疫熒光結(jié)果進(jìn)一步顯示經(jīng)Lps誘導(dǎo)后IL-1β的高表達(dá)可以受
4、到木犀草素的抑制。同時,real-time PCR、免疫熒光以及western blot技術(shù)證實(shí)2μg·mL-1Lps組促血管生成相關(guān)因子PDGF、VEGF、TF、HIF-1α的表達(dá)增高(P<0.05),Luteolin60μmol·mL-1處理組較Lps作用組PDGF、VEGF、HIF-1α表達(dá)低(P<0.05),而對TF的表達(dá)無顯著變化(P>0.05)。在巨噬細(xì)胞M2極化實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)30 ng·mL-1 IL-4作用后IL-4作用組較
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