表達(dá)NR1的293T細(xì)胞構(gòu)建及其在抗NMDA受體自身抗體檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、研究目的:通過(guò)構(gòu)建過(guò)表達(dá)NMDA受體NR1亞基的293T細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)一種成本較低的檢測(cè)抗NMDA受體自身抗體的檢測(cè)方法，并在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)初步進(jìn)行抗NMDA受體腦炎患者抗體檢測(cè)并與商品化試劑盒進(jìn)行比較驗(yàn)證檢測(cè)效率。
　　研究方法:1、對(duì)攜帶GRIN1基因的載體質(zhì)粒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得GRIN1全長(zhǎng)編碼序列，然后通過(guò)酶切、連接將該序列接入FUGW質(zhì)粒載體，獲得FUGW-GRIN1-IRES-EGFP質(zhì)粒。2、將連接后載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌，

2、進(jìn)行質(zhì)粒擴(kuò)增，收集并鑒定質(zhì)粒。3、通過(guò)四質(zhì)粒系統(tǒng)將FUGW-GRIN1-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，進(jìn)行慢病毒包裝。4、待293T細(xì)胞內(nèi)病毒包裝、釋放完畢，收集含病毒載體的細(xì)胞培養(yǎng)液，通過(guò)離心收集病毒。5、用攜帶GRIN1基因的慢病毒載體感染目標(biāo)細(xì)胞293T細(xì)胞并驗(yàn)證GRIN1基因表達(dá)。6、以實(shí)驗(yàn)室保存的經(jīng)檢測(cè)抗NMDA受體抗體陽(yáng)性以及陰性的病人腦脊液樣本孵育表達(dá)GRIN1的293T細(xì)胞，并進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)，分析樣本中的抗體情況