復合脂肪干細胞的微米紗補片的實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　比較靜電動態(tài)液體紡紗法制備的大孔徑、高孔隙率的TPU/P(LLA-CL)微米紗支架和傳統(tǒng)靜電紡絲制備的TPU/P(LLA-CL)納米纖維支架的表征，包括兩種支架的表面形貌、力學性能等；研究兩種支架材料與兔脂肪干細胞構建女性盆底組織工程網片的生物相容性。
　　研究方法：
　　1、TPU/P(LLA-CL)微米紗和納米纖維支架的制備和表征測試：將TPU/P(LLA-CL)按照質量比例為100/0，75/25

2、，50/50，25/75，0/100溶解于六氟異丙醇，分別采用靜電動態(tài)液體紡紗技術制備復合微米紗支架、傳統(tǒng)靜電紡絲技術制備復合納米纖維支架；應用掃描電子顯微鏡觀察兩種支架的形貌，計算兩種支架材料的纖維直徑、孔隙率和孔徑的大??；應用萬能材料測試機檢測兩種支架的力學性能；應用傅里葉紅外光譜分析不同比例的支架材料的表面化學性能。
　　2、TPU/P(LLA-CL)微米紗和納米纖維支架復合兔脂肪干細胞構建盆底組織工程補片：分離兔脂肪干細胞

3、，慢病毒介導轉染EGFP對細胞進行標記；將每種支架制備成0.5cm×0.5cm大小的樣本，共分為微米紗、納米纖維和對照組三組（n=3）；將兔脂肪干細胞接種在三組的樣本上，通過掃描電子顯微鏡、倒置熒光顯微鏡、CCK-8實驗法等方法檢測兔脂肪干細胞在兩種支架表面的黏附、生長和增殖情況；組織學切片HE染色分析細胞長入支架的情況。
　　研究結果：
　　1、微米紗粗細不均，表面粗糙，納米纖維支架的纖維粗細均勻，表面光滑；微米紗的平均直

4、徑約為14.05±2.21μm，納米纖維的平均直徑約為1.132±0.18μm，差異具有統(tǒng)計學意義（P?0.05）；微米紗支架的平均孔徑（550.78±142.60μm2）明顯大于納米纖維支架（69.05±19.18μm2），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；微米紗支架孔隙率（79.09±3.22％）明顯高于納米纖維支架（61.8±1.64%），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。同一種質量比例的TPU/P(LLA-CL)微米紗和納米

5、纖維支架力學性能差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。微米紗支架，TPU/P(LLA-CL)為50/50時斷裂應力最大（11.5±3.43Mpa），與天然陰道壁組織力學性能最接近。五種不同比例的納米纖維支架，隨著TPU比例的增加，斷裂應力隨之增大。微米紗支架和納米纖維支架表面TPU和P(LLA-CL)沒有發(fā)生化學反應。
　　2、CCK-8試驗顯示接種細胞1d后，三組之間吸光度值無明顯差異，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.806）；接種細胞后

6、4d，微米紗支架上的吸光度值大于納米纖維支架和空白板的吸光度值，但差異無統(tǒng)計學意義（p=0.083），隨著培養(yǎng)細胞時間的延長，三組在接種細胞7d后的吸光度值均高于其1d和4d的吸光度值；在接種細胞7d時，納米纖維支架組與對照組之間吸光度值差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05），微米紗支架與納米纖維支架之間，微米紗支架與對照組之間的差異性均具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。根據HE染色結果分析得到細胞接種1d、4d和7d后，ADSCs長入納米纖

7、維支架的平均深度分別為（36.50?3.08μm、37.06?2.23μm和40.17?4.96μm），第1d和4d（P=0.06）、4d和7d（P=0.06）、1d和7d（P=0.22）之間差異無統(tǒng)計學意義。ADSCs長入微米紗支架的平均深度分別為250.00?33.62μm，350.90?38.92μm和449.01?51.73μm，第1d和4d（P<0.05）、4d和7d（P<0.05）、1d和7d（P<0.05）之間差異均具有統(tǒng)