過表達CADM1與IGF-1R抑制劑PPP對人骨肉瘤U-2OS細胞抑制作用的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：使用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，探討過表達腫瘤抑制基因CADM1以及IGF-1R阻滯劑PPP對人骨肉瘤U-2OS細胞株起抑癌作用的差異蛋白，為進一步蛋白質(zhì)芯片制作、蛋白質(zhì)間相互作用、新藥設(shè)計的分子靶點研究提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：實驗分過表達CADM1組與轉(zhuǎn)染空載體組和PPP實驗組與對照組。
　　1.過表達CADM1組與轉(zhuǎn)染空載體組：取過表達CADM1的人骨肉瘤U-2OS-CADM1細胞株（課題組公開專利201510924952.

2、7，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號：CCTCC NO：C201518）及轉(zhuǎn)染空載體人骨肉瘤U-2OS細胞株進行細胞復(fù)蘇、擴增培養(yǎng)，提取細胞總蛋白，運用雙向電泳技術(shù)鑒定出其中的差異蛋白，并查閱相關(guān)數(shù)據(jù)庫和資料，進行對比分析。
　　2. PPP實驗組與對照組：取人骨肉瘤U-2OS細胞株進行細胞復(fù)蘇、擴增培養(yǎng)。PPP組加入PPP8.0μM（DMSO溶解），對照組加入等量DMSO，提取細胞總蛋白質(zhì)，運用雙向電泳技術(shù)鑒定出其中的差異蛋白，并

3、進行質(zhì)譜分析及查閱相關(guān)數(shù)據(jù)庫和資料，進行對比分析。
　　結(jié)果：1.過表達CADM1組與轉(zhuǎn)染空載體組細胞總蛋白，重復(fù)3次進行雙向電泳實驗，實驗有效分離了細胞總蛋白，凝膠圖譜背景低，蛋白點清晰可見。雙向電泳實驗結(jié)果可見蛋白質(zhì)點894±19個，與空載體對照株比較，U-2os-CADM1細胞株有23個蛋白點表達顯著上調(diào)，21個蛋白點表達顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實驗選取了其中12個顯著性差異表達的蛋白位點進行了質(zhì)譜實驗分

4、析，其中被成功檢測的蛋白位點有6個，分別是：乳酸脫氫酶B鏈（LDHB）、α-烯醇化酶（ENOA）、半乳糖激酶（GALK1）、Ⅱ型細胞骨架1角蛋白（K2C1）、人組氨酸磷酸酶蛋白（PHP14）、Ⅰ型細胞骨架9角蛋白（K1C9）。
　　2. PPP實驗組與對照組細胞總蛋白，重復(fù)3次進行雙向電泳實驗，有效分離了細胞總蛋白，凝膠圖譜背景低，蛋白點清晰可見。雙向電泳實驗結(jié)果可見蛋白質(zhì)點795±23個，與對照組比較，PPP組有25個蛋白點表達

5、顯著上調(diào)，30個蛋白點表達顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。實驗選取了其中12個顯著性差異表達的蛋白位點進行了質(zhì)譜實驗分析，其中被成功檢測的蛋白位點有6個，分別是：巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、D型多巴色素脫羧酶（DDT）、Ⅱ型細胞骨架1角蛋白（K2C1）、可溶抗藥性相關(guān)鈣結(jié)合蛋白（SRI）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTP1）、黃素還原酶（BLVRB）。
　　結(jié)論：1.實驗成功運用雙向電泳、質(zhì)譜分析等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)成功分

6、離并鑒定：乳酸脫氫酶B鏈（LDHB）、α-烯醇化酶（ENOA）、半乳糖激酶（GALK1）、Ⅱ型細胞骨架1角蛋白（K2C1）、人組氨酸磷酸酶蛋白（PHP14）、Ⅰ型細胞骨架9角蛋白（K1C9）6種蛋白在過表達CADM1組表達顯著差異，并檢索相關(guān)文獻進行分析。
　　2.實驗成功運用雙向電泳、質(zhì)譜分析等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)成功分離并鑒定：巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、D型多巴色素脫羧酶（DDT）、Ⅱ型細胞骨架1角蛋白（K2C1）、可溶抗藥性