玉米須總皂苷提取工藝比較及改善糖尿病并發(fā)癥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:以半仿生法、水提法與乙醇浸提法三種不同的方法對(duì)玉米須總皂苷的提取工藝進(jìn)行研究，比較三種提取法的優(yōu)缺點(diǎn)，為玉米須總皂苷工藝研究、工業(yè)化發(fā)展提供依據(jù)。用純化后的玉米須總皂苷處理糖尿病小鼠，探討預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的效果。
　　 方法:
　　 1.玉米須總皂苷的提取工藝的研究:首先確立紫外可見分光光度法對(duì)玉米須總皂苷的含量進(jìn)行定量測(cè)定。通過(guò)單因素探討酸提取時(shí)間、堿提取時(shí)間、超聲功率、料液比等因素對(duì)玉米須總皂苷提取率的影響，采

2、用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選出半仿生法、水提法、醇提法提取玉米須總皂苷的最佳工藝參數(shù)，然后比較三種提取法在最佳提取工藝中的提取率。
　　 2.玉米須總皂苷純化工藝的研究:選用D101大孔吸附樹脂純化乙醇浸提法得到的玉米須總皂苷，分別從提取液濃度、流速、不同濃度的乙醇洗脫劑等方面探討其純化工藝。
　　 3.玉米須總皂苷預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的研究:SPF級(jí)昆明種小鼠（合格證號(hào):SCXK（鄂）2008-0003），雄性，體重18-22g，由

3、武漢生物制品研究所提供，動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境符合清潔標(biāo)準(zhǔn)，小鼠正常飼養(yǎng)一周后供試。取健康昆明種小鼠50只，雄性。腹腔注射鏈脲佐菌素200mg/kg，給藥前禁食禁水12h，給藥后禁食12h，但不禁水，三天后測(cè)血糖，測(cè)血糖前禁食一夜，次日早測(cè)血糖，取血糖值在14-20mmol/L的小鼠為鏈脲佐菌素型糖尿病模型小鼠。鏈脲佐菌素造模成功的糖尿病小鼠隨機(jī)分成3組，每組10只，但每組預(yù)備3只以免小鼠死亡。分別為模型組:鏈脲佐菌素模型成功的小鼠按等體積的生理

4、鹽水灌胃;陽(yáng)性組:給予羅格列酮按1mg/kg體重灌胃;實(shí)驗(yàn)組:玉米須總皂苷提取物一次給與400mg/kg體重灌胃，模型小鼠都喂養(yǎng)高脂飼料;正常組:取正常小鼠給予等體積的生理鹽水灌胃，正常組喂養(yǎng)普通飼料外，四組連續(xù)給灌喂4周，第5周對(duì)各組小鼠進(jìn)行眼球采血，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。
　　 結(jié)果:
　　 1.三種不同提取工藝比較:半仿生法的最佳提取工藝是A2B2C2D3，即酸(P=2.5)提取時(shí)間為90min，堿(P=7.5)提取時(shí)間為

5、90min，超聲功率為70W，料液比為1∶40，各因素影響作用主次順序?yàn)锳酸提取時(shí)間＞D料液比＞C超聲功率＞B堿提取時(shí)間，玉米須總皂苷提取率為0.676％。
　　 水提法最佳的提取條件為A3C2B2，即提取時(shí)間為120min，超聲功率為70W，料液比為1∶30，各因素影響作用主次順序?yàn)锳提取時(shí)間＞C料液比＞B超聲功率，玉米須總皂苷提取率為0.329％。
　　 乙醇提取法的最佳提取條件為A1C3B3D3，即乙醇濃度為60％

6、，提取時(shí)間為120min，超聲功率為90W，料液比為1∶40，各因素影響作用主次順序?yàn)镈料液比＞C超聲時(shí)間＞A乙醇濃度＞B提取時(shí)間，玉米須總皂苷提取率0.564％。
　　 三種提取法的玉米須總皂苷提取率比較結(jié)果:半仿生法提取率為0.683％，水溶劑提取率為0.341％，乙醇提取率為0.535％。其中半仿生法在三種提取工藝中提取率最高，可能原因是通過(guò)酸堿的作用使玉米須細(xì)胞壁破裂，使有效成分大量溶出，因此使玉米須總皂苷提取率提高。<

7、br>　　 2.D101大孔吸附樹脂純化的最佳條件:上樣體積為20ml，流速確定為2ml/min，樣品濃度為44.96mg/ml，最佳洗脫液濃度為70％的乙醇。在D101樹脂純化的最佳工藝條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)下，洗脫液中玉米須總皂苷的含量為36.91mg/ml，且工藝穩(wěn)定。
　　 3.糖尿病小鼠模型的建立:用鏈脲佐菌素處理小鼠后，所測(cè)小鼠的血糖平均值為16.2 mmol/L，模型組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)，表明造模成功

8、。
　　 血糖指標(biāo):實(shí)驗(yàn)組（玉米須總皂苷）、陽(yáng)性組（羅格列酮）與模型組比較，都能顯著地降低了血糖(P＜0.01);表明實(shí)驗(yàn)組玉米須總皂苷有降低糖尿病血糖的作用。
　　 TC（總膽固醇）、TG（甘油三酯）指標(biāo):模型組與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01)，表明鏈脲佐菌素型糖尿病小鼠可引發(fā)脂類代謝異常。實(shí)驗(yàn)組與模型組相比較差異有顯著性(P＜0.05)，表明實(shí)驗(yàn)組玉米須總皂苷對(duì)糖尿病小鼠脂代謝異常有改善的作用。
　　

9、 CR（肌酐）、BUN（尿素氮）指標(biāo):實(shí)驗(yàn)組與模型組比較小鼠血中的肌酐有顯著性差異(P＜0.01)，血中的尿素氮有差異性(P＜0.05)，表明實(shí)驗(yàn)組玉米須總皂苷對(duì)糖尿病小鼠腎功能的改善有一定作用。
　　 小鼠體重、腎重、腎重/體重指標(biāo):實(shí)驗(yàn)組（玉米須總皂苷）與模型組腎重/體重的比較中實(shí)驗(yàn)組與模型組相比均有顯著性差異(P＜0.01)，表明實(shí)驗(yàn)組玉米須總皂苷對(duì)糖尿病小鼠腎腫大有減少，對(duì)腎臟有一定保護(hù)作用。
　　 腎臟形態(tài)學(xué)觀

10、察:正常組小鼠腎臟腎小球體積正常，球囊腔清晰可見，腎小管上皮細(xì)胞胞漿淡染。模型組小鼠腎小球腫脹，囊腔變窄，近端小管、遠(yuǎn)端小管形狀部分被破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，腎小管也有腫脹現(xiàn)象，模型組(X100)腎小球包裹的囊腔基本變形。實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)部分腎小管腫脹的現(xiàn)象，但腎小球形態(tài)、囊腔基本正常，表明實(shí)驗(yàn)組玉米須總皂苷對(duì)糖尿病小鼠腎小球病變有預(yù)防作用。
　　 結(jié)論:首次用半仿生法探討玉米須總皂苷的提取工藝，并與水提法、乙醇浸提法對(duì)玉米須總皂苷的提取工藝