MeJA對(duì)猴頭5L0433菌株麥角甾醇合成的影響及消減文庫(kù)的ESTs分析.pdf

1、本研究以猴頭(Hericium erinaceus Pers.)菌絲體為實(shí)驗(yàn)材料,建立了猴頭菌絲體液體搖瓶培養(yǎng)產(chǎn)麥角甾醇最佳調(diào)控方法。并利用抑制性消減雜交技術(shù)(Suppression subtractive hybridization,SSH)構(gòu)建了猴頭菌絲體正向消減文庫(kù)。從消減文庫(kù)中篩選特異基因片段并進(jìn)行初步的生物信息學(xué)分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、建立了MeJA誘導(dǎo)猴頭5L0433菌絲體生產(chǎn)麥角甾醇技術(shù)：
　　

2、 猴頭菌液體發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)麥角甾醇可以利用以下培養(yǎng)技術(shù)來(lái)提高麥角甾醇的生產(chǎn)量:培養(yǎng)基:麥芽糖20g,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂1.5g,酵母提取物10g,水1000ml,pH自然。接種后,25℃靜止培養(yǎng)2d,25℃,150r/min震蕩培養(yǎng)8天后加入無(wú)菌50μmol·L-1MeJA,誘導(dǎo)第11天收獲菌絲,麥角甾醇生產(chǎn)量達(dá)到最大值1.882mg/100ml。
　　 2、MeJA對(duì)猴頭5L0433麥角甾醇合成的影響：
　　 MeJA

3、(茉莉酸甲酯)誘導(dǎo)子促進(jìn)麥角甾醇的積累研究揭示:MeJA誘導(dǎo)子的添加對(duì)猴頭液體發(fā)酵培養(yǎng)菌絲體的生長(zhǎng)、麥角甾醇的含量、生長(zhǎng)量體現(xiàn)了一定的促進(jìn)作用。綜合菌絲產(chǎn)率和麥角甾醇含量確定了使用50pmol·L-1最佳MeJA濃度對(duì)猴頭菌絲體進(jìn)行誘導(dǎo)。在MeJA誘導(dǎo)第8d時(shí)菌絲產(chǎn)量最高為0.96g/100ml。MeJA在10μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1濃度條件下,50μmol·L-1和100μ

4、mol·L-1菌絲體產(chǎn)率分別為0.31g/100ml和0.33g/100ml,顯著高于對(duì)照(0.27g/100ml)。MeJA濃度為50μmol·L-1時(shí),干菌絲麥角甾醇含量最大為1.603mg·g-1,是對(duì)照(1.260mg·g-1)的1.27倍。
　　 3、消減文庫(kù)特異基因片段初步生物信息學(xué)分析：
　　 成功構(gòu)建了MeJA誘導(dǎo)下猴頭正向消減文庫(kù)。應(yīng)用BLAST軟件將消減文庫(kù)篩選到的特異基因ESTs片段序列與GenBa

5、nk中序列進(jìn)行同源性比對(duì),同時(shí)運(yùn)用COG功能分類(lèi)及GO功能分類(lèi)對(duì)序列進(jìn)行了初步的生物信息學(xué)分析。在正向文庫(kù)MhmrA進(jìn)行GO功能分類(lèi)的結(jié)果表明,文庫(kù)中細(xì)胞組件功能包含有細(xì)胞、細(xì)胞器、蛋白質(zhì)復(fù)合體這三類(lèi)。文庫(kù)中分子功能包含有抗氧化活性、催化活性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、翻譯調(diào)控活性等,文庫(kù)中生物學(xué)途徑功能包含細(xì)胞程序、生理過(guò)程、生化過(guò)程的調(diào)控、對(duì)刺激的反應(yīng)這四類(lèi)。在正向文庫(kù)MhmrA進(jìn)行COG功能分類(lèi)的結(jié)果表明,從各種功能基因的片段所占比例來(lái)看,G