大蒜多糖抑制EB病毒早期抗原、衣殼抗原表達及核酸復制的體外研究.pdf

1、目的：探討大蒜多糖（Garlic polysaccharide，GPs）對EB病毒早期抗原（Earlyantigen，EA）和衣殼抗原（Capsid antigen，VCA）表達以及核酸復制的體外作用。
　　方法：采用CCK-8法分別檢測GPs作用于Raji細胞和B95-8細胞的安全藥物濃度。通過丁酸鈉（NaB，4.0 mM/mL）和巴豆油（CTO，500ng/ml）聯(lián)合誘導Raji細胞表達EB病毒EA和B95-8細胞表達VCA抗

2、原，采用間接免疫熒光（IIF）法觀察GPs對EA和VCA表達的影響；熒光定量逆轉錄PCR（qRT-PCR）檢測GPs對EB病毒裂解期關鍵誘導因子BZLF1表達的影響；同時應用流式細胞術（FCM）檢測Raji細胞凋亡情況，以驗證該濃度的 GPs對細胞為安全濃度。Raji細胞為EB病毒I期潛伏感染，NaB/CTO可誘導EB病毒進入裂解期復制，使用EB病毒核酸定量PCR試劑盒檢測GPs對EB病毒核酸復制的影響，并用qRT-PCR觀察其對核抗原

3、1（EBNA-1）表達的影響。結果：1、CCK-8法檢測結果顯示：≤2.00mg/ml的GPs為Raji和B95-8細胞的安全濃度，且24，48和72h的安全濃度是一致的（P>0.05）。
　　2、在誘導 EA表達的 Raji細胞中,與陽性對照組相比，加入1mg/ml GPs組的EA抗原表達的抑制率為12.55％，2mg/ml時為62.70%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3、在誘導VCA表達的B95-8細胞中，

4、與陽性對照組相比，加入1mg/ml GPs組的VCA抗原表達的抑制率為43.86%，2mg/ml時為66.92%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4、在誘導EA表達的Raji細胞中檢測BZLF1 mRNA發(fā)現(xiàn)：1.00和2.00mg/ml的GPs對BZLF1表達的抑制率分別為4.86%（P>0.05）和19.44%（P<0.05）。
　　5、流式細胞術證實1.00和2.00mg/ml的GPs均不引起Raji細胞凋亡

5、率增加，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明GPs確實對EB病毒EA和VCA的表達具有顯著的抑制作用。
　　6、EB病毒核酸檢測發(fā)現(xiàn)：GPs對潛伏期和裂解期的核酸抑制率分別為60.27%和39.06%,對 EBNA-1 mRNA的抑制率分別為38.7%和36.4%均具有顯著差異（P<0.05）。表明GPs對EB病毒核酸復制也有明顯的抑制作用。
　　結論：1、在Raji和B95-8細胞中，采用CCK-8法測定GPs的安全藥物