辣椒疫霉(Phytophthora capsici)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白Pcsda1的基因克隆與功能研究.pdf

1、辣椒疫霉（Phytophthora capsici）是對(duì)蔬菜作物有較強(qiáng)毒性的病原體，它在世界范圍內(nèi)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失(Erwin and Ribeiro，1996; Lamour et al.，2012b)。辣椒疫霉的主要寄主是辣椒和葫蘆科作物。在過(guò)去的幾十年間，隨著寄主作物的農(nóng)業(yè)耕種的地域分布的擴(kuò)大，辣椒疫霉的影響范圍也越來(lái)越大，而且它的抗藥性在不斷增強(qiáng)，寄主范圍也在不斷擴(kuò)大。和疫霉屬中的其他成員（晚疫病原體致病疫霉和櫟樹(shù)猝死病原體

2、橡膠疫霉）一樣，辣椒疫霉也有很強(qiáng)的破壞力和相同的爆發(fā)性流行病學(xué)。辣椒疫霉可以在寄主作物上短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量的無(wú)性孢子。此外，辣椒疫霉還能在兩種交配型之間進(jìn)行減數(shù)分裂，產(chǎn)生厚壁的卵孢子。卵孢子能夠在幾年內(nèi)給受侵染的地區(qū)的作物生產(chǎn)造成損失，另一方面卵孢子能夠維持菌體的雜交優(yōu)勢(shì)和遺傳多樣性。
　　 細(xì)胞周期調(diào)控蛋白SDA1是真核細(xì)胞有絲分裂的調(diào)控蛋白，最早報(bào)道在釀酒酵母中，研究證明其在酵母有絲分裂的G1期發(fā)揮作用。而在疫霉中對(duì)細(xì)胞周期調(diào)

3、控蛋白的相關(guān)研究較少，因此對(duì)辣椒疫霉的細(xì)胞周期調(diào)控蛋白類似蛋白SDA1進(jìn)行了相關(guān)的研究。我們的研究?jī)?nèi)容主要包括以下幾方面:
　　 (1)對(duì)辣椒疫霉菌株SD33的SDA1基因進(jìn)行克隆，生物信息學(xué)分析和系統(tǒng)進(jìn)化分析。從辣椒疫霉基因組DNA中成功克隆到了SDA1基因，將其命名為Pcsda(l)。對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析表明，此基因序列含有明顯的SDA1功能結(jié)構(gòu)域，并且與釀酒酵母中的同源基因結(jié)構(gòu)相似。通過(guò)對(duì)不同物種的類似基因序列進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)

4、分析，我們發(fā)現(xiàn)不同物種的類似序列聚集到了相應(yīng)的不同分支上，說(shuō)明此基因在卵菌內(nèi)具有一定的保守性。
　　 (2)對(duì)辣椒疫霉菌體內(nèi)的SDA1在不同發(fā)育時(shí)期和不同的侵染階段的表達(dá)量進(jìn)行分析。用熒光定量PCR的方法對(duì)SDA1基因的表達(dá)量分析表明，在孢子囊階段和萌發(fā)的休止孢時(shí)期，基因的表達(dá)量程上調(diào)趨勢(shì);而在菌體侵染寄主12-24小時(shí)左右，此基因的表達(dá)量也程明顯的上調(diào)趨勢(shì)。
　　 (3)通過(guò)基因沉默實(shí)驗(yàn)在菌體自身水平上對(duì)基因功能進(jìn)行研