人類(lèi)腫瘤基因FP248和多聚組氨酸融合乙肝抗原SS1在畢赤氏酵母中的表達(dá).pdf

1、本文對(duì)人類(lèi)腫瘤基因FP248和多聚組氨酸融合乙肝抗原SS1在畢赤氏酵母中的表達(dá)分兩部分進(jìn)行研究： 第一部分：FP248是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)腫瘤相關(guān)基因。本文使用畢赤氏酵母胞內(nèi)表達(dá)載體pPIC3.5k對(duì)FP248進(jìn)行了克隆及表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)P248能夠在畢赤氏酵母GS115胞內(nèi)得到表達(dá)，只是其表達(dá)量偏低并且呈不溶的包涵體形式。為便于純化，我們采取了優(yōu)化其基因序列編碼子以及去除起始密碼子前的polyA結(jié)構(gòu)以觀察其對(duì)表達(dá)水平的影響。

2、同時(shí)對(duì)發(fā)酵誘導(dǎo)條件進(jìn)行了一系列的優(yōu)化措施，在沒(méi)有得到可溶性蛋白的情況下，使包涵體蛋白的表達(dá)量盡量提高。另外，最后對(duì)酵母包涵體的洗滌，變性，復(fù)性等作了一定的研究工作，以期為畢赤氏酵母表達(dá)系統(tǒng)的深入研究起到一定的指導(dǎo)作用。 第二部分：乙肝重組抗原SpreS1(簡(jiǎn)稱(chēng)SS1抗原)較S抗原有更強(qiáng)的免疫原性，可望有更好的臨床應(yīng)用前景。為了便于表達(dá)產(chǎn)物的純化，本文研究了利用化學(xué)合成的寡聚核苷酸鏈和PCR擴(kuò)增，在SS1基因的5’端和3’端分別融合

3、了6His-EK和6His的編碼序列，將其重組質(zhì)粒pPIC3.5k-6His-EK-SS1、pPIC3.5k-SS1-6His轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢赤氏酵母菌GS115中，篩選鑒定得到的重組酵母工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，然后采用鎳離子柱(Ni-NTABasin)純化表達(dá)產(chǎn)物，純化的蛋白樣品經(jīng)ELISA效價(jià)測(cè)定、SDS-PAGE膠和WesternBlot分析，結(jié)果表明融合抗原6His-EK-SS1和SS1-6His在畢赤氏酵母中均能表達(dá)，純化的產(chǎn)物仍有免疫