HO-1、SOD2和Mfn2在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中的表達(dá)及丁苯酞保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis，MS)是一種累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的慢性炎性脫髓鞘性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。研究表明，氧化應(yīng)激和線粒體損傷在MS的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究不同劑量丁苯酞對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)小鼠脊髓組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)HO-1和線粒體損傷標(biāo)志物SOD2、Mfn2表達(dá)水平的影響。初步探討丁苯酞

2、對(duì)EAE小鼠神經(jīng)功能障礙的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:C57BL/6小鼠使用MOG35-55作為抗原免疫建立EAE模型。以神經(jīng)功能評(píng)分2分及以上為模型成功，隨機(jī)分為低劑量NBP組、高劑量NBP組、地塞米松組和EAE組，并設(shè)正常對(duì)照組。低劑量NBP組(LDN)、高劑量NBP組(HDN)小鼠分別腹腔注射丁苯酞80mg/kg/d、120mg/kg/d。地塞米松組(DXM)小鼠給予地塞米松磷酸鈉注射液0.07mg/kg/d腹腔

3、注射;正常對(duì)照組及EAE組小鼠每日腹腔注射等體積DMSO，共14天。分別于發(fā)病后第0天、第7天及第14天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察C57BL/6小鼠自免疫后的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、發(fā)病情況及神經(jīng)功能評(píng)分。隨后處死小鼠取脊髓組織，以HE染色在光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠脊髓炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)情況;以免疫組化方法觀察小鼠脊髓腰膨大部位HO-1、SOD2及Mfn2的表達(dá)情況;黃嘌呤氧化法測(cè)定血清SOD的濃度;使用qRT-PCR方法測(cè)定小鼠脊髓腰膨大部位HO-1 mRN

4、A、SOD2mRNA以及Mfn2mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、各組小鼠臨床表現(xiàn)觀察:正常對(duì)照組小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中均正常，且體重逐漸增加。EAE組小鼠抗原免疫后出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、體重下降等表現(xiàn)。EAE組小鼠發(fā)病達(dá)高峰期時(shí)癥狀最嚴(yán)重，小鼠出現(xiàn)背部潰瘍、四肢癱瘓及大小便失禁。低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組小鼠發(fā)病給予藥物治療后，與EAE組小鼠比較，體重下降程度較輕，臨床癥狀表現(xiàn)相對(duì)較輕。
　　2、

5、神經(jīng)功能評(píng)分比較:計(jì)算各組中每只小鼠的最高神經(jīng)功能評(píng)分的均數(shù)，并進(jìn)行比較。EAE組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分高于低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）。高劑量NBP組神經(jīng)功能評(píng)分明顯低于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3、各組小鼠脊髓組織HO-1表達(dá)情況比較:分別于后第0天、第7天及第14天時(shí)，EAE組、低劑量

6、NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對(duì)照組相比，小鼠脊髓組織HO-1 mRNA表達(dá)水平、HO-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。于發(fā)病高峰期及緩解期小鼠脊髓組織中，低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組上述指標(biāo)高于EAE組（P＜0.05）;高劑量NBP組上述指標(biāo)明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組上述指標(biāo)相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

7、　　4、各組小鼠脊髓組織SOD2表達(dá)情況比較:分別于后第0天、第7天及第14天時(shí)，EAE組、低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對(duì)照組相比，小鼠脊髓組織SOD2mRNA表達(dá)水平、SOD2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。于發(fā)病高峰期及緩解期小鼠脊髓組織中，低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組上述指標(biāo)高于EAE組（P＜0.05）;高劑量NBP組上述指標(biāo)明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜

8、0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組上述指標(biāo)相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5、各組小鼠脊髓組織Mfn2表達(dá)情況比較:分別于后第0天、第7天及第14天時(shí)，EAE組、低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對(duì)照組相比，小鼠脊髓組織Mfn2mRNA表達(dá)水平、Mfn2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜O.05)。于發(fā)病高峰期及緩解期小鼠脊髓組織中，低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組上述指標(biāo)高于E

9、AE組（P＜0.05）;高劑量NBP組上述指標(biāo)明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組上述指標(biāo)相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6、血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量比較:分別于后第0天、第7天及第14天時(shí)，EAE組、低劑量NBP組、高劑量NBP組及地塞米松組與對(duì)照組相比，小鼠血清SOD濃度明顯增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。低劑量NBP組、高劑量NBP組及

10、地塞米松組小鼠血清SOD濃度高于EAE組（P＜0.05）;高劑量NBP組小鼠血清SOD濃度明顯高于EAE組、低劑量NBP組及地塞米松組（P＜0.05）;低劑量NBP組與地塞米松組小鼠血清SOD濃度相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、EAE發(fā)病早期就出現(xiàn)線粒體的損傷，丁苯酞與地塞米松均能降低EAE小鼠的神經(jīng)功能障礙。
　　2、丁苯酞對(duì)于EAE小鼠神經(jīng)功能缺失的保護(hù)作用存在劑量效應(yīng)，大劑量丁苯酞