三角渦蟲再生前后ALP和ACP的動(dòng)態(tài)變化及部分理化性質(zhì)研究.pdf

1、本文以白云山淡水三角渦蟲(Dugesiasp)為材料，對(duì)其體內(nèi)堿性磷酸酶(AlkalinePhosphatase，ALP)和酸性磷酸酶(AcidPhosphatase，ACP)的分布以及在喂食后和切割再生過程中兩者活性的動(dòng)態(tài)變化情況進(jìn)行了研究，同時(shí)對(duì)堿性磷酸酶進(jìn)行了分離純化和部分理化性質(zhì)分析，對(duì)ALP和ACP在渦蟲再生及食物消化過程中的作用和堿性磷酸酶的酶學(xué)性質(zhì)與穩(wěn)定性以及三角渦蟲對(duì)環(huán)境的適應(yīng)機(jī)制進(jìn)行了探討。 方法：采用Gomo

2、ri鈣-鈷法和Gomori鉛法分別對(duì)ALP和ACP進(jìn)行了組織化學(xué)定位，測(cè)定了喂食后和切割再生過程中三角渦蟲體內(nèi)ALP和ACP活性的動(dòng)態(tài)變化情況，通過有機(jī)溶劑沉淀法對(duì)渦蟲體內(nèi)ALP進(jìn)行了分離純化，并以pNPP為底物研究了部分理化性質(zhì)。 結(jié)果表明：(1)ALP定位于三角渦蟲腸上皮、咽內(nèi)外表皮、咽部神經(jīng)以及體表的上皮細(xì)胞等處；ACP也定位于咽部、腸上皮、體表的上皮細(xì)胞等處。(2)喂食后(前240h)渦蟲體內(nèi)ALP和ACP的活性均發(fā)生了

3、一定程度的變化，其中ALP在24h時(shí)達(dá)到了最高活性值，ACP在240h時(shí)達(dá)到了最高活性值。單因素方差分析結(jié)果表明：喂食后渦蟲體內(nèi)ALP酶活性發(fā)生了一定程度的變化，但總體上沒有達(dá)到顯著水平；而喂食后渦蟲體內(nèi)ACP活性則發(fā)生了較大程度的變化。與對(duì)照相比，在36h、48h、72h、192h、240h時(shí)差異達(dá)到極顯著水平(p＜0.01)，在12h、144h時(shí)差異達(dá)到顯著水平(p＜0.05)。(3)人工切割后，渦蟲再生(前240h)過程中體內(nèi)AL

4、P和ACP的活性均發(fā)生了一定程度的變化。其中，ALP在再生4h時(shí)酶活性明顯升高，達(dá)到了一個(gè)最高值，與對(duì)照相比，差異達(dá)到了顯著水平(p＜0.05)；而ACP在0h、4h、48h均出現(xiàn)了較高活性值，但差異都沒有達(dá)到顯著水平(p＞0.05)。(4)ALP純化后，以pNPP為底物時(shí)，測(cè)得白云山淡水三角渦蟲ALP的最適pH是8.6；最適反應(yīng)溫度為40℃；Km為0.57mmol/L；Mg2+對(duì)其起激活作用；Co2+和Zn2+在低濃度時(shí)起激活作用，高

5、濃度時(shí)起抑制作用；Ba2+、Cu2+、Ca2+、Ag+、H2PO4-和HPO42-對(duì)其有強(qiáng)烈的抑制作用。 結(jié)論：(1)渦蟲體內(nèi)咽、腸及體表上皮等部位分布了大量的ALP和ACP，推測(cè)它們的存在與機(jī)體體內(nèi)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)、損傷和衰老細(xì)胞的清除降解、機(jī)體防御等生理活動(dòng)密切相關(guān)。(2)ALP和ACP在渦蟲食物消化、營(yíng)養(yǎng)方式轉(zhuǎn)換和再生過程中起到十分重要的作用。(3)白云山淡水三角渦蟲ALP顯示了較強(qiáng)的穩(wěn)定性，這在一定程度上暗示了渦蟲較強(qiáng)的環(huán)