AE3蛋白在心肌細(xì)胞缺氧預(yù)處理保護(hù)中的作用.pdf

1、目的:以正常及穩(wěn)定低表達(dá)AE3基因的大鼠心肌樣細(xì)胞(H9c2)為研究對象,建立缺氧預(yù)適應(yīng)保護(hù)模型,研究AE3蛋白在缺氧預(yù)適應(yīng)保護(hù)中的作用并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:將大鼠心肌樣細(xì)胞(H9c2),均勻接種在六孔培養(yǎng)板上,隨機(jī)分為五個(gè)組:未轉(zhuǎn)染正常對照(Control)組、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒(陰性對照組,Non-silencing shRNA)組、缺氧復(fù)氧(A/R)組、缺氧預(yù)適應(yīng)(APC)組、穩(wěn)定低表達(dá)AE3基因+缺

2、氧預(yù)適應(yīng)(RNAi+APC)組。檢測以下指標(biāo):①細(xì)胞存活率；②H9c2中AE3 mRNA的表達(dá)；③H9c2中AE3蛋白的表達(dá)；④細(xì)胞凋亡的程度；⑤細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量；⑥細(xì)胞中SOD及GSH-Px的活性；⑦細(xì)胞中Ca2+含量；⑧細(xì)胞中Cl-含量
　　 結(jié)果:H9c2經(jīng)A/R處理后,細(xì)胞活力明顯下降,AE3 mRNA和蛋白表達(dá)水平升高,細(xì)胞凋亡的程度嚴(yán)重,ROS含量增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,細(xì)胞中Ca2+及C

3、l-啥量升高,與Control組比較具有顯著性差異(p<0.01)。H9c2經(jīng)APC處理后,細(xì)胞活力較A/R組明顯升高,AE3 mRNA和蛋白表達(dá)水平也明顯升高,細(xì)胞凋亡的程度顯著減輕,ROS含量減少,SOD及GSH-Px的酶活性上升,細(xì)胞中Ca2+及Cl-含量下降,與A/R組比較具有顯著性差異(p<0.01)。穩(wěn)定低表達(dá)AE3基因的H9c2細(xì)胞經(jīng)APC處理后,細(xì)胞的活力較APC組明顯下降,AE3mRNA和蛋白表達(dá)水平也相應(yīng)的明顯下降,

4、細(xì)胞凋亡的程度明顯加重,ROS含量增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,細(xì)胞中Ca2+及Cl-含量升高,與APC組比較具有顯著性差異(p<0.01)。而轉(zhuǎn)入非特異shRNA組,以上相應(yīng)的指標(biāo)并沒有特異性變化,與Control組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論:AE3蛋白介導(dǎo)心肌缺氧預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用來對抗缺氧復(fù)氧帶來的心肌損傷,機(jī)制可能為通過抑制胞內(nèi)氯過載及減少細(xì)胞內(nèi)ROS含量,進(jìn)而抑制缺氧/復(fù)氧所致的氧化應(yīng)激、鈣