NY-ESO-1的克隆、表達(dá)、抗體制備及其臨床應(yīng)用前景的研究.pdf

1、目的：腫瘤是全世界發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人類健康和生命威脅較大的疾病，從免疫學(xué)角度對(duì)其進(jìn)行研究和治療是一條很有希望的途徑。而尋找和研究新的有效的腫瘤抗原是這一途徑的核心問(wèn)題。近年研究發(fā)現(xiàn)CT抗原呈高度的組織限制性表達(dá)、在腫瘤患者體內(nèi)具有免疫原性、可以誘導(dǎo)體液免疫與細(xì)胞免疫等特性，為腫瘤免疫治療提供了新的機(jī)遇。而NY-ESO-1是其中免疫原性最強(qiáng)的分子，本文以分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，克隆腫瘤特異性抗原NY-ESO-1基因，構(gòu)

2、建表達(dá)載體并在大腸桿菌中高效表達(dá)NY-ESO-1全蛋白，制備多抗，并研究該分子在不同類型腫瘤組織中的表達(dá)情況，為深入探討NY-ESO-1表達(dá)機(jī)理及其在腫瘤診斷、免疫治療方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法：用RT-PCR方法從A375細(xì)胞中獲得人NY-ESO-1基因全長(zhǎng)，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)NY-ESO-1蛋白，親和層析進(jìn)行純化，用純化的GST融合蛋白免疫動(dòng)物，獲得多克隆抗體。并通過(guò)NY-ESO-1及其他CT抗原在腫瘤組

3、織中的表達(dá)譜初步觀察NY-ESO-1與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，分析CT抗原多價(jià)疫苗制備的意義。 結(jié)果：成功地克隆了NY-ESO-1基因，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-2/NY-ESO-1，成功優(yōu)化GST-NY-ESO-1蛋白的原核表達(dá)條件，得到高效表達(dá)的NY-ESO-1蛋白，經(jīng)SDS-PAGE分析可觀察到一分子量與理論值相符的誘導(dǎo)表達(dá)帶。用層析柱純化超聲破菌后上清，得到較純的GST-NY-ESO-1，免疫小鼠，獲得高效價(jià)的多克

4、隆抗體。 用RT-PCR的方法分析了NY-ESO-1和MAGE-4、MAGE-12在食管癌和肺癌組織中的表達(dá)。并用融合蛋白分析了患者血清中NY-ESO-1抗體的出現(xiàn)概率，證實(shí)了NY-ESO-1用于腫瘤診斷和治療的意義，并且根據(jù)這一結(jié)果推測(cè)，共價(jià)疫苗會(huì)有更好的前景，因此做了抗原肽理論預(yù)測(cè)，以期在以后的研究中利用這幾個(gè)成員制備出含合適表位的多價(jià)疫苗。 結(jié)論：1、構(gòu)建了人NY-ESO-1基因編碼區(qū)原核表達(dá)載體，獲得了可溶性