SUZ12在肝癌增殖及轉(zhuǎn)移中具體作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　肝癌是人類常見的惡性腫瘤之一，其致死率排惡性腫瘤第二位，外科治療是目前最常規(guī)、最被廣泛接受的治療手段，但是術(shù)后患者復(fù)發(fā)率高，生存期短，盡管隨著新的醫(yī)療手段，如射頻消融術(shù)、介入栓塞術(shù)及分子靶向藥物藥物的出現(xiàn)，使得肝癌的患者的生存期提高，但是肝癌治療的效果仍然不理想，肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)是導(dǎo)致肝癌患者生存周期短的一個(gè)重要的因素，因此對(duì)肝癌的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制的研究，則顯得尤為重要。
　　腫瘤的發(fā)生往往伴隨著基

2、因突變，導(dǎo)致抑癌基因的表達(dá)抑制，促癌基因激活，基因的突變則必然伴隨著基因結(jié)構(gòu)的改變，但是近幾年隨著人們對(duì)表觀遺傳學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)在基因結(jié)構(gòu)的不改變的情況下也就可以誘發(fā)腫瘤，即表觀遺傳修飾的改變，導(dǎo)致了某種基因轉(zhuǎn)錄受到抑制，基因的表觀修飾主要包括DNA甲基化及去甲基化、組蛋白乙酰化及去乙?；确矫?，表觀遺傳學(xué)為腫瘤的研究及治療提供新的方向，在胃癌、腸癌等消化系統(tǒng)實(shí)體腫瘤中發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳改變可以導(dǎo)致基因的染色體組的不穩(wěn)定性，進(jìn)而促進(jìn)了腫瘤

3、的形成，針對(duì)表觀遺傳修飾改變，也開發(fā)出相關(guān)藥物，療效顯著，因此進(jìn)一步研究表觀遺傳修飾在肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具體的作用則顯得尤為重要。
　　SUZ12是PRC2復(fù)合體的亞基，PRC2這在表觀遺傳的修飾中占有重要的作用，可以調(diào)節(jié)組蛋白H3的27位點(diǎn)上的酪氨酸三甲基化，PRC2可以抑制人類胚胎成纖維細(xì)胞中1000多種基因的轉(zhuǎn)錄。目前在肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌發(fā)現(xiàn)SUZ12能促進(jìn)腫瘤的增殖與侵襲轉(zhuǎn)移[1-3]在惡性膠質(zhì)瘤中研究發(fā)現(xiàn)SUZ1

4、2基因在腫瘤中表達(dá)缺失，該基因的缺失導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，具有腫瘤細(xì)胞特性[4,5]。目前研究發(fā)現(xiàn)SUZ12在乙肝相關(guān)性肝癌中，隨著HBV的復(fù)制，PX的作用下SUZ12與ZNF189基因表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志基因BAMBI,CCND2,DKK2, DLK1,EpCAM表達(dá)上調(diào)，而在未轉(zhuǎn)染PX基因中，這些標(biāo)記基因則沒有顯著差異[6]。SUZ12與ZNF198的表達(dá)下調(diào)則促進(jìn)了HBX的復(fù)制與正常肝細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化。SUZ12與ZNF19

5、8的表達(dá)的下降，伴隨著HOTAIR與PLK1的表達(dá)的上調(diào)，引起組蛋白修飾的改變[7]。因此SUZ12對(duì)肝癌的發(fā)生發(fā)展的有著非常重要的意義。但是關(guān)于SUZ12對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其具體機(jī)制目前還不明確。
　　研究目的：
　　研究SUZ12在肝癌中表達(dá)情況，并研究其在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制
　　方法：
　　1、收集肝癌標(biāo)本，用western blot的方法檢查SUZ12在肝癌中的表達(dá)情況，并使

6、用統(tǒng)計(jì)學(xué)明確其相關(guān)。
　　2、購(gòu)置組織芯片，使用IHC技術(shù)研究SUZ12在肝癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，并研究SUZ12與腫瘤患者的術(shù)后生存期的關(guān)系，并做統(tǒng)計(jì)分析。
　　3、使用慢病毒，構(gòu)建SUZ12穩(wěn)定干擾肝癌細(xì)胞株，及SUZ12穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞株，使用 transwell技術(shù)檢測(cè)干擾SUZ12基因表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞Hep3b、SMMC-7721侵襲遷移的變化，及過(guò)表達(dá)SUZ12后腫瘤細(xì)胞系Hep3b、SMMC-7721的遷

7、移與侵襲能力的變化。并使用western blot技術(shù)檢測(cè)干擾與過(guò)表達(dá)后細(xì)胞系Hep3b、SMMC-7721中的E-CADHERN、N-cadhern、Vimatin、MMP-9、MMP-2、P-ERK1/2蛋白的變化
　　4、使用MTT及EDU實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)SUZ12干擾及過(guò)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞株Hep3b、SMMC-7721細(xì)胞株的增殖能力的影響，檢測(cè)SUZ12穩(wěn)定干擾及過(guò)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞的克隆形成的影響。
　　5、驗(yàn)證ERK信號(hào)

8、通路在SUZ12缺失誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力變化中的作用，使用ERK信號(hào)通路抑制劑阻滯相關(guān)信號(hào)通路，檢測(cè)SUZ12穩(wěn)定干擾細(xì)胞系的侵襲與轉(zhuǎn)移的變化及相應(yīng)的E-cadhern、N-cadhern、Vimatin、MMP-9、MMP-2、P-ERK1/2蛋白的變化。
　　結(jié)果：
　　30例肝癌標(biāo)本中有20例患者的腫瘤組織中的SUZ12較其癌旁組織下降，組織芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)SUZ12的降低可以顯著降低腫瘤患者的術(shù)后生存周期，體外實(shí)

9、驗(yàn)發(fā)現(xiàn)干擾SUZ12表達(dá)后肝癌細(xì)胞系的侵襲與轉(zhuǎn)移的能力顯著增強(qiáng)，干擾SUZ12表達(dá)后肝癌細(xì)胞系Hep3b、SMMC-7721的N-cadhern蛋白顯著降低、金屬基質(zhì)酶MMP-9、MMP-2顯著升高，過(guò)表達(dá)SUZ12后則呈現(xiàn)相反的趨勢(shì)，干擾腫瘤細(xì)胞系Hep3b、SMMC-7721后肝癌細(xì)胞的P-ERK1/2顯著升高，使用P-ERK1/2抑制劑后SUZ12穩(wěn)定干擾細(xì)胞株的遷移、侵襲能力能夠的顯著的抑制，P-ERK1/2抑制劑能夠逆轉(zhuǎn)SUZ

10、12穩(wěn)定干擾細(xì)胞株中的N-CADHERN、金屬基質(zhì)酶MMP-9、MMP-2的蛋白變化。但是在MTT實(shí)驗(yàn)、EDU實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)SUZ12的干擾及過(guò)表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞系Hep3b、SMMC-7721的增殖、克隆形成實(shí)驗(yàn)無(wú)顯著影響
　　結(jié)論：
　　1、SUZ12在肝癌細(xì)胞中呈低表達(dá)、SUZ12的降低的肝癌患者其生存周期明顯短于SUZ12未明顯變化及SUZ12升高的患者。
　　2、SUZ12的缺失及過(guò)表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞株Hep3b、SMM