靶向ECFR-PIK3CA的小分子抑制劑在食管鱗癌中抗腫瘤活性的基礎(chǔ)研究.pdf

1、食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的的惡性腫瘤之一，其中食管鱗狀細(xì)胞癌是主要類型，患者整體五年生存率不足20％。食管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在大量分子異常改變，包括TP53、PIK3CA、CDKN2A、RB1、NOTCH1等多個(gè)高頻突變基因。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)EGFR高水平擴(kuò)增同時(shí)其蛋白高表達(dá)基因，功能研究結(jié)果提示，EGFR和PIK3CA有望作為食管鱗癌的治療靶點(diǎn)。
　　方法：
　　本課題根據(jù)研究小組前期工作，針對(duì)EGFR和PIK3CA進(jìn)行靶向小

2、分子抑制劑篩選。首先利用免疫組織化學(xué)方法驗(yàn)證EGFR在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況，然后通過(guò)Westen Blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室食管鱗癌細(xì)胞系中EGFR的表達(dá)情況。其次通過(guò)MTT法考察Erlotinb、Afatinib對(duì)食管鱗癌細(xì)胞系的影響;通過(guò)CCK-8法體外檢測(cè)Erlotinib、Afatinib、Alpelisib對(duì)食管鱗癌細(xì)胞系的IC50值，考察藥物敏感性。進(jìn)一步通過(guò)裸鼠皮下抑瘤實(shí)驗(yàn)考察Erlotinib在體內(nèi)的抗腫瘤活性。最后通過(guò)We

3、stern Blot檢測(cè)藥物處理后信號(hào)通路分子的變化。
　　結(jié)果：
　　與課題組前期工作和國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀一致，對(duì)于食管鱗癌組織的免疫組織化學(xué)方法驗(yàn)證了EGFR在食管鱗癌組織中的高表達(dá)。Western Blot結(jié)果顯示EGFR在食管鱗癌細(xì)胞系KYSE150、KYSE180、KYSE450中高表達(dá)。MTT法考察發(fā)現(xiàn)Erlotinib、Afatinib對(duì)食管鱗癌細(xì)胞系的增殖能力有抑制作用。CCK-8法檢測(cè)出Erlotinib、Af

4、atinib以及Alpelisib對(duì)食管鱗癌細(xì)胞系KYSE150、KYSE180、KYSE450、KYSE510的IC50值，發(fā)現(xiàn)KYSE450對(duì)Erlotinib、Afatinib敏感，其余三種細(xì)胞系對(duì)Alpelisib敏感。裸鼠皮下瘤生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)表明Erlotinib可以延緩KYSE450在小鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)速度，但結(jié)局與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western-Blot提示Erlotinib處理后KYSE450細(xì)胞系中p-ERK下調(diào)，而

5、p-AKT上調(diào);Afatinib處理后KYSE450細(xì)胞系中p-ERK下調(diào)，而p-AKT無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1.KYSE450對(duì)Erlotinib和Afatinib敏感，對(duì)Alpelisib不敏感;KYSES10、KYSE150、KYSE180對(duì)Alpelisib敏感，對(duì)Erlotinib和Afatinib不敏感。
　　2.表明Erlotinib影響KYSE450細(xì)胞系腫瘤生長(zhǎng)速度，但終點(diǎn)與對(duì)照組無(wú)顯著差異。