重組人腦利鈉肽對(duì)膿毒癥犬腸道粘膜核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和TNF-α、IL-6干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:膿毒血癥是由感染引發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合癥，可以引起多臟器功能衰竭(MODS)，大多是繼發(fā)于重度創(chuàng)傷、感染及大手術(shù)后的一種臨床綜合征，臨床上主要表現(xiàn)為急性肺損傷，心功能不全和腎功能衰竭，或者休克。在目前的臨床診斷和治療當(dāng)中，表現(xiàn)的十分復(fù)雜和嚴(yán)重，給臨床醫(yī)生的工作帶來(lái)很大挑戰(zhàn)。在全身的各個(gè)臟器中，根據(jù)目前的研究結(jié)果，消化道是膿毒血癥激發(fā)MODS的啟動(dòng)器官，也是集營(yíng)養(yǎng)、代謝、免疫和屏障等功能于一體的多功能器官。當(dāng)腸道受侵害時(shí)，腸黏膜屏障

2、作用被破壞，腸道內(nèi)細(xì)菌庫(kù)細(xì)菌大量繁殖，造成腸道菌群移位，可誘發(fā)MODS的發(fā)生或加重原發(fā)疾病的損害。
　　 本文通過(guò)觀察重組人腦利鈉肽(rhBNP)對(duì)犬膿毒血癥模型腸道粘膜組織中核因子KB(NF-κB)和細(xì)胞因子TNF-a、IL-6表達(dá)的干預(yù)作用，旨在探討B(tài)NP對(duì)膿毒血癥腸道粘膜組織中核因子KB(NF-κB)，TNF-a和IL-6的抑制作用及其作用機(jī)制，并為膿毒血癥所致腸道感染的臨床防治提供參考依據(jù)。
　　 方法:將實(shí)驗(yàn)動(dòng)

3、物健康清潔犬30只，隨機(jī)分為五組，即空白對(duì)照組(A)組、高濃度rhBNP干預(yù)(B)組、標(biāo)準(zhǔn)rhBNP干預(yù)(C)組、低濃度rhBNP干預(yù)(D)組、膿毒血癥模型(E)組。每組6只，對(duì)B、C、D、E組采用注射脂多糖(LPS)內(nèi)毒素法建立犬膿毒血癥模型，制作模型成功后予以不同劑量rhBNP干預(yù)，并于rhBNP干預(yù)前后干預(yù)前后分別采用westernblot法測(cè)NF-κB的活性，及用ELISA法檢測(cè)TNF-a、IL-6的表達(dá)情況。具體過(guò)程是將犬麻醉

4、后監(jiān)測(cè)犬的生命體征，當(dāng)犬的狀態(tài)穩(wěn)定30分鐘后，經(jīng)中心靜脈在30分鐘內(nèi)注入LPSlmg/kg。各組犬于4小時(shí)，8小時(shí)，12小時(shí)，24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)抽取靜脈血，并于24小時(shí)后將模型犬處死。解剖犬并取腸標(biāo)本，進(jìn)行病理學(xué)檢查，將取出的腸標(biāo)本放置于零下70攝氏度低溫冰箱保存，進(jìn)一步用westernblot法檢測(cè)NF-κB的活性表達(dá)。將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)抽取的犬膿毒血癥模型及使用rhBNP干預(yù)后的犬模型的靜脈血經(jīng)每分鐘10000轉(zhuǎn)的離心機(jī)離心后，使用ELISA

5、法檢測(cè)TNF-a、IL-6的活性表達(dá)情況。計(jì)量資料均以均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，用SPSS軟件分析系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)分析采用t檢驗(yàn)和方差分析。
　　 結(jié)果:犬經(jīng)過(guò)注射內(nèi)毒素(LPS)制作成功為膿毒癥模型后腸黏膜NF-κB活性及TNF-a、IL—6含量均較空白對(duì)照組明顯增高(P＜0.01)，內(nèi)毒素休克組腸黏膜NF-κB活性經(jīng)過(guò)westernblot法檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)明顯增強(qiáng)。其中TNF-a于24h時(shí)達(dá)到高峰點(diǎn)，IL-6含量水平持續(xù)

6、升高至6h時(shí)間點(diǎn)。其腸道黏膜病理切片表現(xiàn)出組織壞死及水腫。而經(jīng)過(guò)rhBNP干預(yù)后各干預(yù)組腸黏膜NF-κB活性及TNF-a、IL-6含量均較膿毒血癥模型組明顯降低(P＜0.01)，同時(shí)干預(yù)組的腸道黏膜組織病理切片表現(xiàn)的組織壞死及水腫較模型組腸道黏膜組織病理切片有明顯改善。說(shuō)明重組人腦利鈉肽（rhBNP）干預(yù)后能抑制升高的NF-κB活性和TNF-a、IL-6含量。
　　 結(jié)論:1.重組人腦利鈉肽（rhBNP）能減少NF-κB在膿毒癥