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文檔簡介
1、目的:急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由于彌漫性肺泡、毛細(xì)血管膜損傷導(dǎo)致的以非心源性肺水腫和炎癥為病理特征的急性呼吸衰竭,是臨床危重癥,雖然經(jīng)過近100年的不斷醫(yī)學(xué)探索,但其死亡率高達(dá)40-50%[1]。其發(fā)病機制、救治方法是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的重點、熱點。根據(jù)創(chuàng)傷、感染、藥物、組織缺血-再灌注損傷等已知的臨床危險因素復(fù)制的ARDS模型,是研究其發(fā)病機制及治療方法的必要條
2、件。肺脂肪栓塞(pulmonary fat embolism PFE)的診斷標(biāo)準(zhǔn)是肺實質(zhì)中發(fā)現(xiàn)脂肪滴,多發(fā)生于長骨骨折、吸脂術(shù)患者中,嚴(yán)重者可引發(fā)ARDS和脂肪栓塞綜合征。脂肪栓塞綜合征(fat embolism syndrome FES)是指脂肪顆粒阻塞血管腔而引起的一系列病理生理改變的臨床綜合征,其主要癥狀為呼吸困難,低氧血癥,無頭部外傷的神經(jīng)癥狀和皮膚黏膜出血點。雖然Zenker于1862年首次對PFE及FES進(jìn)行描述,但肺脂肪栓
3、塞引起ARDS的發(fā)病機制目前尚未完全明了,目前的學(xué)說有機械阻塞理論、生物化學(xué)炎癥反應(yīng)理論、肺循環(huán)障礙凝結(jié)理論、細(xì)胞凋亡理論、基因發(fā)病理論。本實驗選用同種骨髓脂肪作為栓子更符合實際發(fā)病機制。在用同種異體新西蘭白兔骨髓脂肪建立肺脂肪栓塞引起的急性呼吸窘迫的動模模型基礎(chǔ)上,觀察甲強龍、低分子肝素對ARDS的防治作用。
方法:制備骨髓脂肪,將10只健康清潔級成年新西蘭白兔處死后,無菌條件下,從四肢長骨骨髓腔內(nèi)刮取骨髓,收集后使用超細(xì)勻
4、漿機分散乳化,初步乳化后再使用超聲細(xì)胞破碎儀充分破膜,液化的油脂混合物置于4℃低溫離心機中以4000r/min離心40 min,取上層透明均一的橙黃色油脂,-80℃保存?zhèn)溆谩J褂们胺胖糜?7℃恒溫水浴箱內(nèi),融解充分、漩渦儀勻質(zhì)后使用。
選用健康清潔級成年新西蘭白兔42只(雌雄不限),兔齡(150+12)d,體重(2.5±0.3)kg,將42只新西蘭白兔隨機分3組。A組予0.8ml/kg骨髓脂肪,從股靜脈以0.05ml/min速
5、度注射。B組在注射骨髓脂肪之前1h及之后12h分別靜脈注射1mg/kg甲強龍。C組在注射骨髓脂肪之前3h及之后12h分別皮下注射300U/kg低分子肝素鈉。對3組家兔連續(xù)觀察24h,觀察計算死亡率,檢測存活家兔動脈血氧分壓、二氧化碳分壓,血漿游離脂肪酸,于24h結(jié)束時做肺組織形態(tài)及病理學(xué)檢查。
統(tǒng)計學(xué)方法:死亡率以只為單位,作X2檢驗。血氣分析指標(biāo)PO2、PCO2,游離脂肪酸作t檢驗,同組間作配對t檢驗,不同組之間作兩樣本均數(shù)
6、比t檢驗,采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計。
結(jié)果:
1、死亡率計算比較3組死亡兔均表現(xiàn)為呼吸急促、過度通氣、抽搐、死亡,24h內(nèi)死亡率以A組最高,為8只(57%),B組1只(7.14%),C組6只(42.8%)。3組1小時內(nèi)共死亡14只,占總死亡率的93.3%。其中A組與B組相比X2檢驗差異有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05,而C組與A組相比X2檢驗,差異無統(tǒng)計學(xué)意義P>0.05。
2、血液學(xué)檢查結(jié)果
(1)
7、動脈血氧分壓PO2對比:3組均以注射脂肪后0.5h PO2最低,與注射脂肪前比同組間作配對t檢驗P<0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,此后逐漸升高。注射脂肪后0.5h B與A組之間兩樣本均數(shù)比較,t檢驗P<0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。注射脂肪后0.5h C與A組之間兩樣本均數(shù)比較,t檢驗P>0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
(2)動脈血二氧化碳分壓PCO2對比:3組均以注射脂肪后0.5h PO2最低,與注射脂肪前比同組間作配對t檢驗P<
8、0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。注射脂肪后0.5h B與A組之間兩樣本均數(shù)比較,t檢驗P<0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。注射栓塞后0.5h C與A組之間兩樣本均數(shù)比較,t檢驗P>0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
(3)血漿游離脂肪酸(FFA):3組存活家兔血漿游離脂肪酸A、C組注射脂肪厚4h最高,B組注射脂肪后8h最高,與前比同組間作配對t檢驗P<0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。注射脂肪后4h、8h B與A組之間兩樣本均數(shù)比較,t檢驗P<0
9、.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。注射脂肪后4h C與A組之間兩樣本均數(shù)比較,t檢驗P>0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
3、組織學(xué)檢查結(jié)果大體肺組織標(biāo)本檢查:3組存活的新西蘭白兔經(jīng)解剖后肉眼觀察,雙肺有不同程度的彌慢性充血性水腫,呈暗紅色,呈肝樣變,彈性降低,肺質(zhì)量增加,切面見組織腫脹,結(jié)構(gòu)松散,切面見淺血性液體滲出。病變程度:A組>C組>B組。肺組織冰凍切片的改良油紅O染色:3組存活的新西蘭白兔經(jīng)解剖后,取右肺下葉新西蘭白兔的新鮮肺組
10、織行恒溫冷凍切片后改良油紅0染色,均于肺小血管腔內(nèi)見橘紅色脂肪滴,200倍光鏡下經(jīng)計算脂肪滴數(shù)A組>C組>B組。肺石蠟包埋HE染色:3組存活的新西蘭白兔經(jīng)解剖后,取右肺上葉左肺下葉用4%甲醛固定,石蠟包埋后蘇木精-伊紅(H-E)染色,見栓塞肺毛細(xì)血管內(nèi)皮腫脹,血管壁增厚。肺泡間質(zhì)水腫,炎性細(xì)胞細(xì)胞浸潤,中性粒細(xì)胞為主。部分肺泡壁完整性缺失,基膜斷裂,肺泡腔內(nèi)可見淡粉紅色水腫液。病變程度:A組>C組>B組,未栓塞正常兔肺組織H-E正常。肺
11、石蠟包埋馬松染色(觀察彈性纖維):3組存活的家兔經(jīng)解剖后,取右肺中葉、左肺上葉新西蘭白兔的新鮮肺組織用4%甲醛固定,石蠟包埋后馬松染色,見部分栓塞血管周圍有彈性纖維斷裂現(xiàn)象,但無纖維增多。病變程度:A組>C組>B組,未栓塞正常兔肺組織馬松染色正常。
結(jié)論:
1、選用新西蘭白兔同種異體骨髓脂肪作為栓子可較成功復(fù)制符合臨床骨折后肺脂肪栓塞引起的ARDS動物模型,更符合骨折后實際發(fā)病機制。
2、甲強龍、低分子肝素
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