Let-7microRNA在小鼠胎肺發(fā)育時期的表達檢測及其腺病毒載體質粒的構建.pdf

1、微RNA(microRNA,miRNA)是一類在進化上高度保守、長度約20～24個核苷酸的小分子非編碼RNA,能通過與靶基因3'非翻譯區(qū)相結合,從而抑制靶基因的翻譯或降解靶基因。Let-7 microRNA是發(fā)現(xiàn)較早的一類miRNA,最早在線蟲上發(fā)現(xiàn)let-7能調控細胞分裂的時序。此后大量證據(jù)表明,let-7參與動物多個器官發(fā)育的調控過程,并與人類疾病發(fā)生密切相關。本研究利用real-time PCR技術檢測了let-7家族8個成員在小

2、鼠胚胎肺發(fā)育過程中的表達趨勢,發(fā)現(xiàn)從小鼠假腺肺的前中期到囊狀肺的前期,let-7家族8個成員均有表達,且表達量均持續(xù)升高,到囊狀肺的中后期,其中l(wèi)et-7a、let-7d、let-7e、let-7f、let-7i五個家族成員表達量略有下降,let-7b、let-7c表達量沒有明顯變化、而let-7g表達量則有所升高。接著,本實驗選取8個家族成員中表達豐度最高的let-7a和let-7d,利用原位雜交技術分析它們在小鼠胚胎肺發(fā)育過程中的表

3、達模式,結果表明:let-7a和let-7d在小鼠胚胎肺的上皮和間充質中均有明顯表達,且在肺芽遠端上皮末梢中的表達較為強烈,到出生后三天(P3),其在胚胎肺上皮和間充質中的表達減弱,這種表達趨勢的變化與real-time PCR的結果相近。在此基礎上,本實驗通過構建pDC316-CMV-control、pDC316-CMV-let-7a以及pDC316-mCMV-mK-ras三個腺病毒表達載體,并將其分別轉染細胞,利用RT-PCR以及w