傳染性法氏囊病病毒結(jié)構(gòu)VP2基因在家蠶中的表達及亞單位疫苗的初步研究.pdf

1、傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病毒引起的一種急性高致病性傳染病,是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一,該傳染病以免疫抑制為特征,除造成直接損失外,還會造成雞群對其他病原微生物的易感性增強和免疫失敗,給養(yǎng)禽業(yè)帶來更大的間接損失。自從上世紀80年代出現(xiàn)了變異株和超強毒株后,傳統(tǒng)的滅活疫苗和弱毒疫苗已經(jīng)面臨著嚴峻的考驗。我國養(yǎng)禽業(yè)日益擴大,而IBDV的流行情況也越來越復雜,且有效的IBDV疫苗非常少,因此迫切需要解決這一矛盾。
　　 家蠶養(yǎng)殖

2、是我國的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè),用家蠶反應(yīng)器表達IBDV VP2蛋白旨在將我國的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)與不斷發(fā)展的分子生物學技術(shù)緊密結(jié)合起來,為開發(fā)高效廣譜的IBDV亞單位疫苗打下基礎(chǔ)。
　　 IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白VP2蛋白是最主要宿主保護性抗原,在VP2上的點突變是造成IBDV變異的主要原因。為研究VP2蛋白作為IBDV亞單位疫苗的抗原,本研究根據(jù)Genbank發(fā)表的IBDV基因序列,設(shè)計合成一對引物,利用RT-PCR技術(shù)擴增出IBDV的結(jié)構(gòu)蛋白VP2

3、基因。將IBDV LYZS株的VP2蛋白基因重組于家蠶桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBKblue中,將重組的載體pBK-IVP2與野生家蠶病毒的線性化DNA(Bom—Ex)共轉(zhuǎn)染到家蠶培養(yǎng)細胞中,獲得重組病毒vBmNPV—IVP2。用重組病毒感染家蠶5齡起幼蟲或蠶蛹后,再利用瓊脂擴散試驗、SDS-PAGE和Western blotting等方法檢測蠶血淋巴中重組VP2蛋白的表達量以及免疫反應(yīng)性。結(jié)果表明重組VP2蛋白具有免疫反應(yīng)性,家蠶蠶蛹感染5天

4、時在蠶血淋巴中的表達量最高。用感染后第5天的家蠶蠶蛹血淋巴作抗原加入本實驗特制的免疫增強劑制備油佐劑疫苗,進行了該疫苗的安全性試驗和免疫-攻毒試驗。在安全性試驗中,利用制備的亞單位疫苗對4周齡SPF雞進行注射,每只雞注射0.6ml,注射后逐日觀察雞的采食、飲水、精神狀態(tài)等,連續(xù)觀察14天,然后剖檢,進行疫苗注射部位及內(nèi)臟器官、肌肉、皮下等觀察。觀察結(jié)果顯示,未出現(xiàn)任何副反應(yīng)。
　　 在免疫-攻毒試驗中,對非免疫雛雞進行28日齡免