乳酸菌抑制法檢測(cè)牛乳中抗生素殘留.pdf

1、GB19301-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)生乳》規(guī)定，“應(yīng)用抗生素期間和休藥期間的乳汁不應(yīng)用作生乳”，即用于乳制品加工的生乳必須是無抗乳?，F(xiàn)行的酶聯(lián)免疫法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法難以對(duì)多種抗生素殘留同時(shí)進(jìn)行檢測(cè);GB/T4789.27-2008《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)鮮乳中抗生素殘留檢驗(yàn)》采用的嗜熱鏈球菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌，其菌種的保存、活化、培養(yǎng)要求嚴(yán)格，也不適宜于在企業(yè)推廣。實(shí)踐表明，乳酸菌不能在有抗乳中發(fā)酵酸乳。因此，從理論上講，采用

2、乳酸菌抑制法能夠有效判定生乳是有抗還是無抗。直投式乳酸菌劑商品化程度高、方便保存活化、易于推廣。因此，根據(jù)當(dāng)牛乳中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測(cè)限時(shí)，乳酸菌能發(fā)酵牛乳生成酸乳的原理，本課題建立了利用乳酸菌抑制法判定無抗乳的檢測(cè)方法，用該方法測(cè)定了20種常見抗生素的檢出限，并對(duì)市售牛乳及乳粉樣品進(jìn)行檢測(cè)，并與國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比驗(yàn)證。本論文的主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論包括以下三個(gè)方面。
　　(1)乳酸菌抑制法的建立。以檢測(cè)菌種、接

3、種量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間為考察因素，通過單因素試驗(yàn)，確立了乳酸菌抑制法最佳檢測(cè)菌種為嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的復(fù)合菌種;檢測(cè)菌種活化方法為:在無抗乳中接直投式乳酸菌劑0.01g，43℃發(fā)酵6h，2～5℃冷藏備用;檢測(cè)方法為:液態(tài)牛乳樣品經(jīng)90℃、10 min殺菌后，冷卻至43℃，接檢測(cè)菌種3～4 g/100g，43℃發(fā)酵4h，若未凝乳，則認(rèn)為該牛乳為有抗乳，若發(fā)生凝乳，則認(rèn)為該牛乳為無抗乳。
　　(2)乳酸菌抑制法測(cè)定牛乳中20

4、種抗生素的檢出限。用高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定商品獸藥抗生素的有效含量，通過向無抗乳中添加不同濃度抗生素溶液配制成含不同濃度的有抗乳樣品，發(fā)酵4h剛好不能凝乳的抗生素濃度即認(rèn)定為乳酸菌抑制法對(duì)該種抗生素的檢出限。通過對(duì)比每種抗生素的檢出限與其在牛乳中的最大殘留限量(MRL)。結(jié)果表明，乳酸菌抑制法檢測(cè)20種常見抗生素的檢出限為:頭孢噻呋3μg/kg，林可霉素20μg/kg，頭孢氨芐80μg/kg，頭孢喹肟6μg/kg，紅霉素8μg/kg，

5、泰樂菌素45μg/kg，替米考星45μg/kg，土霉素60μg/kg，四環(huán)素50μg/kg，金霉素50μg/kg，阿莫西林8μg/kg，氨芐西林8μg/kg，芐星青霉素18μg/kg，普魯卡因青霉素17μg/kg，氟甲喹900μg/kg，雙氫鏈霉素700μg/g，磺胺二甲嘧500μg/kg，慶大霉素600μg/kg，恩諾沙星700μg/kg，粘菌素800μg/kg。20種常見抗生素中的前12種抗生素的檢出限不大于其在牛乳中的MRL，說明

6、乳酸菌抑制法判定合格的無抗乳，其12種抗生素殘留量不會(huì)超標(biāo);20種常見抗生素中后8種抗生素的檢出限大于其在牛乳中的MRL，說明乳酸菌抑制法判定合格的無抗乳，其8種抗生素殘留量可能會(huì)超標(biāo)。
　　(3)乳酸菌抑制法的驗(yàn)證及與GB/T4789.27的比對(duì)研究。乳酸菌抑制法檢測(cè)市售85份液態(tài)乳和26份乳粉樣品（乳粉用蒸餾水按質(zhì)量比1∶6復(fù)原），與GB/T4789.27-2008《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)鮮乳中抗生素殘留檢驗(yàn)》的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比