牛乳清活性蛋白質(zhì)的結晶特性研究.pdf

1、牛乳清中含有許多活性蛋白質(zhì)，如免疫球蛋白G(IgG)、牛血清蛋白(BSA)、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶。前人獲得這些蛋白質(zhì)主要是利用柱層析的手段，但是層析有其自身的局限性，包括設備及耗材成本高、過程操作要求高等。結晶作為一種設備耗材成本小、操作簡單的單元操作，是分離乳清活性蛋白質(zhì)另一種選擇。本工作就是以此為目標，選擇及建立一種合適的結晶方法，并利用這種方法探索得到乳清蛋白質(zhì)結晶體的適宜條件以及其結晶行為，以期為乳清活性蛋白質(zhì)的結晶分離打下基

2、礎。
　　首先，為了驗證這種方法是否可以得到乳清中的蛋白質(zhì)，本工作以BSA+鹽+水體系為樣本，研究了在1-3 M NaCl、pH4.7-8.0之間的1.0-3.0 mg/mL BSA的溶解度數(shù)據(jù)以及成核數(shù)據(jù)。接著通過實驗方法獲取了2.5 mg/mL BSA、pH7.0、1 M NaCl條件下的BSA結晶體的形貌圖像，并利用凍干實驗對結晶體中的雜質(zhì)進行了實驗研究。最后利用固液相平衡原理得到了一個回歸方程，并利用本實驗數(shù)據(jù)擬合了該方程

3、的參數(shù)。
　　本論文還初步探索了乳清體系的結晶條件，發(fā)現(xiàn)pH7.0時，IgG在乳清上清液中的含量會明顯減少，而其它pH(4.7、5.8、8.0)下，隨著鹽濃度的增加，乳清蛋白中的各種蛋白的比例變化不明顯，因此，在pH4.7-8.0之間時，pH7.0可以作為乳清結晶的較理想pH值，而IgG可以作為目標蛋白質(zhì)。
　　最后，本工作還利用熒光倒置顯微鏡分別觀察了高鹽濃度和低鹽濃度下，pH4.7和pH7.0時的乳清結晶行為，并以同條件