羅氏乳桿菌JC-1無細胞上清培養(yǎng)液降膽固醇能力的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、高熱量食物的攝入和不合理的膳食結構致使動脈硬化、高血壓、靜脈血栓等心腦血管疾病的發(fā)病率逐年上升,嚴重影響著人類的健康。而血清膽固醇含量過高則是引起這一系列疾病的重要原因之一。但是其作用機理還處于假說階段,尚未定論。本論文從體外模型角度繼續(xù)探索乳酸菌移除膽固醇的作用機理。
   羅氏乳桿菌普遍存在于人類和大部分動物的腸道中,是目前已報道的具有降膽固醇能力的乳酸菌之一,具有耐酸、耐膽鹽和腸道定殖特性,具有研究價值。本文研究發(fā)現(xiàn)羅氏乳

2、桿菌JC-I在無細胞參與的情況下仍表現(xiàn)出膽固醇移除能力,其無細胞上清培養(yǎng)液(CFS)的膽固醇移除率可達到68.57%,且移除率隨CFS濃度的降低而降低。沉淀圈現(xiàn)象表明JC-I的CFS中含有膽鹽水解酶(BSH)。CFS通過加熱處理和調pH使BSH失活或由BSH作用的共沉淀現(xiàn)象不能發(fā)生的情況下,觀察CFS是否還表現(xiàn)出膽固醇移除能力,其中BSH活力通過HPLC測得。實驗結果表明,經(jīng)過熱處理的CFS膽固醇移除率和BSH活性大幅度降低;CFS的p

3、H值為7.0時,由BSH引起的共沉淀作用不能發(fā)生,但是CFS仍具有膽固醇移除能力。因此推斷,CFS中含有除BSH以外的可移除膽固醇的有效成分。
   CFS分別經(jīng)過乙醇提取、乙酸乙酯萃取、70%硫酸銨處理后,經(jīng)過鹽析獲得的蛋白沉淀有較高的移除膽固醇能力。又經(jīng)TCA處理除去蛋白和SDS使蛋白變性以后,CFS基本喪失移除能力。CFS經(jīng)多種蛋白酶消化處理后,CFS也失去膽固醇移除能力,進一步說明此有效成分為蛋白質類。
   本

4、文對此有效蛋白進行了分離純化,在純化過程中,CFS通過超濾得到濃縮液,硫酸銨分級沉淀的飽和度范圍為50%-70%,獲得的蛋白沉淀無BSH活性,但移除膽固醇作用的活性純化倍數(shù)可達5.6。樣品通過DEAE Sepharose F.F陰離子交換層析進一步分離純化。采用pH為7.0、含0-0.5mol/L NaCl的磷酸鹽緩沖液進行梯度洗脫時,分離效果較好,得到了電泳純的目的蛋白,比酶活為61.6U/mg,純化倍數(shù)為11.7。經(jīng)SDS-PAGE

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