壓力損傷后小梁細(xì)胞中BACE1的表達(dá)變化.pdf

1、目的:探索不同壓力條件下小梁細(xì)胞中BACE1的表達(dá)情況，以期為青光眼病理過程中的房水循環(huán)障礙發(fā)病機(jī)制提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:對(duì)人來源的小梁細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)并建立加壓模型，分別用20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg四個(gè)壓力點(diǎn)加壓培養(yǎng)2h，繼而常規(guī)培養(yǎng)條件下分別存活0h、12h、24h、48h;在24只雄性SD大鼠中隨機(jī)選擇20只眼前房加壓注射生理鹽水至110mmHg維持60min建立雙眼高眼壓模型，分別存活6

2、h、12h、1d、3d、7d，另外4只眼前房穿刺作為對(duì)照組;采集人眼標(biāo)本3只，分別來自于急性眼外傷所致眼高壓和慢性開角型青光眼眼高壓患者的眼球，并已征得患者同意。收集各組培養(yǎng)細(xì)胞及小梁網(wǎng)組織冰凍切片，行臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞的活性率，H-E染色觀察細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)與形態(tài)，BACE1、FN、LN、NSE、Ⅷ因子免疫化學(xué)染色檢測(cè)。
　　結(jié)果:1、免疫化學(xué)染色顯示人眼小梁細(xì)胞NSE、FN、LN染色呈陽性表達(dá)，Ⅷ因子染色呈陰性表達(dá)。20mmHg、

3、40mmHg壓力培養(yǎng)時(shí)，HE染色結(jié)果顯示細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與對(duì)照組相比變化不大，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示細(xì)胞的存活率與對(duì)照組相比沒有太大變化，但是當(dāng)壓力升高到60mmHg與80mmHg時(shí)，HE染色可見部分細(xì)胞的細(xì)胞壁皺縮，輪廓模糊且胞漿內(nèi)出現(xiàn)少量空泡，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示細(xì)胞死亡率明顯上升。免疫化學(xué)染色顯示LN的表達(dá)在加壓的初始階段逐漸增高，但是在壓力升高到40mmHg時(shí)，隨著壓力的增高和存活時(shí)間的延長(zhǎng)，LN的表達(dá)開始下調(diào)，壓力增加到80mmHg，存活48h

4、時(shí)，LN降低十分明顯;而BACE1的表達(dá)則呈現(xiàn)表達(dá)逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)。2、正常大鼠眼球的小梁組織可見較強(qiáng)的帶型LN免疫陽性產(chǎn)物，但未見BACE1的免疫陽性表達(dá)或僅有少量的表達(dá)，高眼壓損傷后6h、12h組可見LN的免疫表達(dá)減弱，小梁組織外層可見明顯的BACE1免疫陽性表達(dá)，高眼壓損傷后1d開始至7d，LN的免疫表達(dá)進(jìn)一步降低，BACE1的表達(dá)則逐漸增強(qiáng)。3、人慢性開角型青光眼眼球的小梁網(wǎng)組織中可見明顯的BACE1免疫陽性產(chǎn)物，急性眼外傷致眼壓