小膠質(zhì)細(xì)胞在腦衰老進(jìn)程中相關(guān)免疫功能改變的研究.pdf

1、目的：⑴檢測(cè)衰老過(guò)程中大腦小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目和形態(tài)的改變；⑵檢測(cè)衰老過(guò)程中大腦小膠質(zhì)細(xì)胞分泌IL-6、IL-1β水平的改變；⑶檢測(cè)衰老過(guò)程中大腦小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬Aβ42能力的改變。 方法：①以McCarthy的方法為基礎(chǔ)，并加以改進(jìn)，采用振搖結(jié)合貼壁分離法純化小膠質(zhì)細(xì)胞；CD11b免疫細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)純化的小膠質(zhì)細(xì)胞純度進(jìn)行鑒定；相差顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察和細(xì)胞計(jì)數(shù)；CCK-8比色法檢測(cè)純化的小膠質(zhì)細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的活力和增殖。②將小

2、膠質(zhì)細(xì)胞以1×105/well種入24孔板，各年齡組小膠質(zhì)細(xì)胞均設(shè)對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為正常衰老組，不加任何干預(yù)；實(shí)驗(yàn)組1加入25ng/mlLPS刺激，實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3分別加入250nM和500nM濃度的Aβ42，孵育24h。24h后取上清液用ELASA法測(cè)定IL-1β和IL-6水平。③用FAM標(biāo)記聚集態(tài)的Aβ42，并孵育小膠質(zhì)細(xì)胞；24h后，吸去介質(zhì)液，并用加有胎盤藍(lán)的PBS平衡鹽溶液清洗小膠質(zhì)細(xì)胞，以消除殘留在細(xì)胞外和細(xì)胞膜

3、上的熒光蛋白；用多功能酶標(biāo)儀分析測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度。 結(jié)果：⑴純化分離的不同年齡組小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行CD11b抗體染色陽(yáng)性細(xì)胞≥95％，培養(yǎng)過(guò)程中未出現(xiàn)明顯的增殖。⑵Aβ42呈劑量依賴性誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌IL-1β和IL-6增加，差異有顯著性意義（P＜0.05）；250nM Aβ42與LPS組IL-6水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；隨大鼠年齡的增大，小膠質(zhì)細(xì)胞分泌IL-1β和IL-6水平呈梯度增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05

4、）。⑶結(jié)果顯示，衰老過(guò)程中小膠質(zhì)細(xì)胞熒光強(qiáng)度呈梯度降低，對(duì)三個(gè)年齡組小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度進(jìn)行方差分析和兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論：①以McCarthy的方法為基礎(chǔ)，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)母牧?，成功培養(yǎng)出不同年齡組SD大鼠源性的小膠質(zhì)細(xì)胞，為下一步研究打下了基礎(chǔ)；衰老過(guò)程中，SD大鼠大腦皮層內(nèi)的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯改變；老年組SD大鼠源性的小膠質(zhì)細(xì)胞的活力明顯低于青年組和中年組。②Aβ42呈劑量依賴性誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)