黃芪升麻藥對(duì)抗氧化活性及協(xié)同作用的研究.pdf

1、我國(guó)中藥資源豐富，是天然抗氧化活性成分的重要來源。我國(guó)中醫(yī)理論講究中藥復(fù)方的應(yīng)用，而藥對(duì)是復(fù)方的基本單位，是連接中藥與方劑的橋梁，兩藥配伍后的療效通常比單藥單獨(dú)使用時(shí)效果更好，表現(xiàn)出協(xié)同作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，黃芪、升麻配伍后抗氧化能力顯著增強(qiáng)。目前對(duì)于兩藥的化學(xué)成分和藥理研究比較多，但對(duì)于兩藥配伍后的抗氧化活性和化學(xué)成分的變化研究較少。本文主要研究了黃芪升麻藥對(duì)的抗氧化活性和物質(zhì)基礎(chǔ)變化，并通過柱層析技術(shù)分離得到了兩單藥的總黃酮，探討了黃

2、芪升麻藥對(duì)抗氧化協(xié)同的作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴利用體外抗氧化實(shí)驗(yàn)（清除DPPH和ABTS自由基清除能力，還原能力）研究了芪麻藥對(duì)乙醇提取物的抗氧化活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)芪麻藥對(duì)的抗氧化能力顯著高于單藥的理論加和，表明此藥對(duì)在抗氧化方面存在顯著的協(xié)同效應(yīng)，并且配伍方式不同協(xié)同作用的大小不同。分析藥對(duì)的多酚和黃酮含量發(fā)現(xiàn)，芪麻藥對(duì)的抗氧化協(xié)同作用或許是由多酚、黃酮含量的變化引起的。
　　 ⑵研究了不同濃度乙醇提取和

3、添加不同金屬離子對(duì)芪麻藥對(duì)抗氧化能力和抗氧化協(xié)同作用的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥對(duì)PM 配對(duì)方式以70％乙醇提取物清除DPPH自由基協(xié)同效果最好，無水乙醇提取物清除ABTS自由基的協(xié)同效果最好。藥對(duì)EM配對(duì)方式以30％乙醇提取物抗氧化協(xié)同效果最好。分析多酚和黃酮含量發(fā)現(xiàn)，藥對(duì)水和無水乙醇提取物兩種配對(duì)方式（PM和EM）均存在協(xié)同效應(yīng)，且藥對(duì)無水乙醇提取物的EM配對(duì)方式增長(zhǎng)率要高于PM方式。因此，選擇無水乙醇為提取溶劑，研究藥對(duì)EM協(xié)同作用的原因

4、，以期找到黃芪-升麻藥對(duì)抗氧化協(xié)同作用的原因。此外，添加金屬離子對(duì)芪麻藥對(duì)抗氧化協(xié)同能力影響不顯著。
　　 ⑶采用HPLC技術(shù)對(duì)芪麻藥對(duì)乙醇提取物物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)芪麻藥對(duì)乙醇提取物中有43個(gè)化合物，利用HPLC-DAD-MS/MS技術(shù)對(duì)這些物質(zhì)進(jìn)行了初步鑒定，共鑒定出14個(gè)化合物，主要為黃酮和三萜皂苷類化合物。采用HPLC-DPPH方法篩選芪麻藥對(duì)乙醇提取物中的抗氧化成分，發(fā)現(xiàn)有11個(gè)物質(zhì)為潛在的抗氧化物質(zhì)，并初步鑒定了

5、其中的10個(gè)物質(zhì)，分別為3′-羥基-5′-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-毗喃葡萄糖苷，升麻酰胺，升麻醇，10-羥基-3，9-二甲氧基紫檀烷，芒柄花苷，9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，芒柄花素，黃芪皂苷Ⅱ,23-O-乙酰基-7,8-去氫升麻醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,4-O-乙?；Х人?。
　　 ⑷采用聚酰胺柱層析分離得到了黃芪和升麻單藥的總黃酮，以進(jìn)一步研究協(xié)同作用的機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪95％乙醇洗脫

6、段與升麻總黃酮和升麻95％乙醇洗脫段均存在顯著的抗氧化協(xié)同作用。采用HPLC-DAD-MS/MS技術(shù)對(duì)黃芪95％乙醇洗脫段進(jìn)行了物質(zhì)鑒定，初步鑒定出5個(gè)物質(zhì)可能與芪麻藥對(duì)的抗氧化協(xié)同作用有關(guān)。其中4個(gè)為黃酮苷類，分別為毛蕊異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,2'-羥基-3',4'-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷,4'-甲氧基異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，毛蕊異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-6''-O-丙二酸酯；