MSO與LDLR基因錯(cuò)配損傷觸發(fā)ERCC6啟動(dòng)TCR修復(fù)LDLR點(diǎn)突變.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
　　利用修飾的單鏈寡核苷酸(MSO)與低密度脂蛋白受體(LDLR)基因錯(cuò)配,模擬DNA損傷以觸發(fā)ERCC6啟動(dòng)TCR偶聯(lián)的LDLR基因修復(fù)。
　　方法:
　　將蟲(chóng)螢光素酶(luc)基因融合在無(wú)義突變的LDLR基因(LDLR-luc)3’端構(gòu)建真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染細(xì)胞制備LDLR無(wú)義突變的細(xì)胞模型。進(jìn)而轉(zhuǎn)染可在LDLR點(diǎn)突變處上下堿基產(chǎn)生1個(gè)或6個(gè)錯(cuò)配的MSO,形成該部位的DNA錯(cuò)配/損傷,并同時(shí)轉(zhuǎn)染ERCC6真核

2、表達(dá)質(zhì)粒,提高細(xì)胞ERCC6蛋白的表達(dá)。通過(guò)測(cè)量luc活性,比較各組間是否有差異。通過(guò)基因測(cè)序,確定其DNA是否被改變?yōu)榕c轉(zhuǎn)染的MSO相同的基因序列。
　　結(jié)果:
　　具有6個(gè)錯(cuò)配的MSO組與僅有1個(gè)錯(cuò)配的MSO組比較,其luc活性顯著升高,表明其基因修復(fù)效率更高。另外,提高ERCC6的表達(dá),基因修復(fù)效率提高了近20倍。通過(guò)酶切鑒定和基因測(cè)序,表明被修復(fù)的基因片段與MSO的基因序列相同。
　　結(jié)論:
　　利用MS

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