MSO與LDLR基因錯配損傷觸發(fā)ERCC6啟動TCR修復(fù)LDLR點突變.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
　　利用修飾的單鏈寡核苷酸(MSO)與低密度脂蛋白受體(LDLR)基因錯配,模擬DNA損傷以觸發(fā)ERCC6啟動TCR偶聯(lián)的LDLR基因修復(fù)。
　　方法:
　　將蟲螢光素酶(luc)基因融合在無義突變的LDLR基因(LDLR-luc)3’端構(gòu)建真核表達載體,轉(zhuǎn)染細胞制備LDLR無義突變的細胞模型。進而轉(zhuǎn)染可在LDLR點突變處上下堿基產(chǎn)生1個或6個錯配的MSO,形成該部位的DNA錯配/損傷,并同時轉(zhuǎn)染ERCC6真核

2、表達質(zhì)粒,提高細胞ERCC6蛋白的表達。通過測量luc活性,比較各組間是否有差異。通過基因測序,確定其DNA是否被改變?yōu)榕c轉(zhuǎn)染的MSO相同的基因序列。
　　結(jié)果:
　　具有6個錯配的MSO組與僅有1個錯配的MSO組比較,其luc活性顯著升高,表明其基因修復(fù)效率更高。另外,提高ERCC6的表達,基因修復(fù)效率提高了近20倍。通過酶切鑒定和基因測序,表明被修復(fù)的基因片段與MSO的基因序列相同。
　　結(jié)論:
　　利用MS

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