Adam28在小鼠成骨細胞樣細胞系MC3T3-E1中的表達研究.pdf

1、牙齒萌出，牙槽骨改建都是牙齒發(fā)育中的正常生理現(xiàn)象，其中萌出通道的形成及牙槽骨改建都是發(fā)育過程中的重要環(huán)節(jié)，在這些過程中成骨細胞發(fā)揮重要作用，它通過釋放細胞因子及自身感受內外環(huán)境等刺激因素，與破骨細胞相互調節(jié)，從而使牙槽骨改建過程中的骨吸收和骨形成達到一種動態(tài)平衡，以保證牙齒發(fā)育過程處于正常狀態(tài)。ADAM28是ADAM家族最近發(fā)現(xiàn)的一種跨膜分泌型糖蛋白，它同樣具有ADAM家族的生理功能：參與細胞增殖，分化，胞外基質分泌﹑裂解基質蛋白和細胞

2、遷移等。研究顯示，ADAM28基因參與了牙胚的發(fā)育過程，并在牙源性間充質細胞的增殖﹑分化和凋亡中發(fā)揮重要的調控作用。同時ADAM28基因具有金屬蛋白酶活性，因而它對于細胞外基質的形成和很多分子的外功能區(qū)處理有重要的調節(jié)作用。
　　本課題的研究目的是從蛋白和mRNA水平探討adam28對小鼠成骨細胞樣細胞MC3T3-E1的生物學特性的影響，并從中分析它可能的作用機制，為今后對ADAM28功能的深入研究提供可靠的實驗和理論依據(jù)。

3、>　　本課題的主要研究內容和結果如下：
　　實驗一：采用細胞培養(yǎng)，免疫組織化學和免疫熒光染色方法檢測ADAM28在成骨細胞的染色情況。結果證實：adam28在體外培養(yǎng)小鼠成骨細胞樣細胞MC3T3-E1上有表達；提示其可能參與了成骨細胞的生物學功能。
　　實驗二：采用細胞培養(yǎng)，RT-PCR方法在mRNA水平上進一步檢測adam28mRNA在小鼠成骨細胞樣細胞MC3T3-E1的表達情況。結果證實：adam28mRNA表達于小鼠成

4、骨細胞樣細胞MC3T3-E1；提示成骨細胞樣細胞MC3T3-E1可能自身分泌adam28。
　　實驗三：通過自制的細胞體外加載裝置，對小鼠成骨細胞樣細胞MC3T3-E1依次施加50KPa，100KPa，150KPa的持續(xù)靜壓力1h后，分別培養(yǎng)24h和48h；觀察細胞在形態(tài)學上的相應變化，并通過免疫組織化學染色方法檢測受力作用后adam28蛋白的表達情況。結果顯示：細胞受力后，adam28免疫組化染色強度隨壓力值的增大而明顯降低；加

5、壓后細胞培養(yǎng)24h和48h無明顯差異；提示不同大小的靜壓力可以影響成骨細胞樣細胞MC3T3-E1上adam28蛋白表達強度，并對成骨細胞的一些生物學活動起到一定作用。
　　實驗四：通過自制的細胞體外加載裝置，對小鼠成骨細胞樣細胞MC3T3-E1依次施加50KPa，100KPa，150KPa的持續(xù)靜壓力1h，分別培養(yǎng)24h和48h；使用RT-PCR的方法在mRNA水平上檢測受力作用后adam28mRNA的表達情況。結果顯示：細胞受力