Rap1b對(duì)鼠前成骨細(xì)胞(Mc3T3-E1)成骨分化早期的影響.pdf

1、目的：Rap1b是一種Ras樣GTP酶，可參與氧化應(yīng)激，通過調(diào)控多種信號(hào)通路如MAPK、B-Raf/MEK/ERK和Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和存活，在增殖、分化、形態(tài)形成及凋亡中起分子開關(guān)的作用，還能調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。還有研究表明Rap1b可以促進(jìn)內(nèi)皮遷移與血管生成，以及可以選擇性地抑制成熟破骨細(xì)胞，進(jìn)而阻斷病理性骨吸收。另外，本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，Rap1b還參與斑馬魚早期胚胎發(fā)育。然而，Rap1b基因?qū)Τ晒欠只^程的

2、調(diào)節(jié)作用，尚無明確的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。因此，了解Rap1b的生物學(xué)功能具有重要意義。MC3T3-E1細(xì)胞是從新生C57BL/6小鼠顱頂骨中分離得到的一種前成骨細(xì)胞，已被證實(shí)其具有成骨細(xì)胞的表型分化特征。因此，本研究以鼠前成骨細(xì)胞(Mc3T3E1)為研究對(duì)象，探討Rap1b對(duì)鼠前成骨(Mc3T3E1)細(xì)胞成骨分化早期的影響，在進(jìn)一步闡明其在成骨分化中的調(diào)節(jié)作用的理論基礎(chǔ)的研究中有重要意義。
　　方法：利用成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)Mc3T3E1成骨向分

3、化，利用實(shí)時(shí)定量PCR分別檢測(cè)誘導(dǎo)后0、3、7d的Rap1 bmRNA的相對(duì)表達(dá)量。同時(shí)向?qū)嶒?yàn)組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染Rap1b-mus-462和Rap1b-mus-703，4d后進(jìn)行ALP染色，同時(shí)測(cè)定Rap1b的mRNA相對(duì)表達(dá)量，并對(duì)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中成骨指標(biāo)ALP、Runx2和Osterix0、3、7d時(shí)的mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。再利用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)Mc3T3E1細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果：Real-time PCR