麗江大黃中四種成分對小鼠顱頂前成骨細胞MC3T3-E1增殖分化的影響.pdf

1、最近研究發(fā)現(xiàn)大黃具有抗骨質疏松的作用，麗江大黃作為中藥大黃的一種，其含有很多活性成分。成骨細胞在骨質疏松中起著至關重要的作用，MC3T3-El細胞系是一個能夠代表成骨細胞分化的經(jīng)典模型，常用來做體外藥物篩選研究。本論文通過實驗探討麗江大黃中的幾種成分對MC3T3-E1細胞分化過程中的影響及可能機制，從而為其在骨質疏松方面的研究提供理論基礎與依據(jù)。本研究分為兩個部分：第一部分建立小鼠顱頂前成骨細胞MC3T3-E1分化模型，對每一階段特異性

2、指標進行檢測以確定MC3T3-E1細胞誘導成功；第二部分研究中藥麗江大黃中4種活性物質脫氧土大黃苷、大黃素、蘆薈大黃素和RDET(含有幾種單體的混合物)對小鼠顱頂前成骨細胞MC3T3-E1增殖與分化的影響。
　　選取2種誘導液：誘導液Ⅰ(抗壞血酸50μg/ml、β-甘油磷酸鈉10mmol/l)與誘導液Ⅱ(抗壞血酸50μg/ml、β-甘油磷酸鈉10mmol/l、地塞米松10-8 mol/l)；采用堿性磷酸酶（ALP）染色法、茜素紅染

3、色法選取最佳誘導液Ⅱ，再通過免疫組化法檢測骨鈣素含量、馮庫薩染色檢測鈣結節(jié)等確定誘導建立模型成功；小鼠顱頂前成骨細胞MC3T3-E1，在誘導液Ⅱ誘導分化的作用下，分化為成骨細胞，采用噻唑藍(MTT)法檢測幾種活性成分對分化后的MC3T3-E1細胞增殖作用；檢測堿性磷酸酶(ALP)的表達以及其活性；茜素紅染色法和馮庫薩染色法檢測鈣化結節(jié)；免疫組化法檢測骨鈣素含量；采用RT-PCR檢測活性成分對OPG/RNNKL表達的影響。
　　通過

4、染色結果確定誘導液Ⅱ與誘導液Ⅰ均能將MC3T3-E1誘導成成骨細胞，但誘導液Ⅱ的效果更佳，因此選取誘導液Ⅱ為誘導液。MTT結果顯示脫氧土大黃苷在10μg/ml以上對MC3T3-E1細胞有促進增殖的影響。RDET與大黃素在40μg/ml以上對MC3T3-E1細胞有促進增殖的作用、蘆薈大黃素沒有明顯的促進增殖影響。ALP染色結果顯示脫氧土大黃苷、蘆薈大黃素、RDET在10μg/ml作用濃度下提高ALP活性，大黃素沒有明顯的作用；而ALP酶活

5、性測定顯示RDET與模型組相差不大。脫氧土大黃苷與RDET可以促進骨鈣素減少。茜素紅染色與馮庫薩染色結果為：蘆薈大黃素與大黃素作用的細胞所產(chǎn)生的礦結節(jié)較多，但大黃素作用的細胞形態(tài)發(fā)生較大的改變。分化早期與中期活性成分對MC3T3-E1細胞中OPG的增多沒有明顯的效果，晚期會發(fā)現(xiàn)RDET促進了OPG數(shù)量的增加。
　　誘導液Ⅱ(抗壞血酸50μg/ml、β-甘油磷酸鈉10mml/l、地塞米松10-8 mol/l)能更好的誘導MC3T3-