骨碎補(bǔ)有效成分柚皮苷對(duì)小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1的增殖、分化和礦化的影響.pdf

1、中藥骨碎補(bǔ)，是水龍骨科植物槲蕨或中華槲蕨的干燥根莖，是中醫(yī)中常采用的治療骨骼疾病的單方藥。骨碎補(bǔ)在骨細(xì)胞和骨缺失的動(dòng)物模型中起著積極的作用。但是到底是骨碎補(bǔ)的何種有效成分在起作用，至今難以確定。很多努力的方向就是從骨碎補(bǔ)粗提物中提取有效成分。多項(xiàng)研究表明總黃酮是骨碎補(bǔ)的主要活性有效部位。柚皮苷是黃酮類的一種化合物，它有抗氧化、抗癌和降低膽固醇的作用。同時(shí)，柚皮苷也是骨碎補(bǔ)的主要成分之一。但是關(guān)于單獨(dú)柚皮苷作用于骨誘導(dǎo)的研究甚少。故本實(shí)驗(yàn)

2、主要研究柚皮苷對(duì)于成骨細(xì)胞的增殖、分化、鈣化的作用。 目的： 檢測(cè)柚皮苷提取液對(duì)成骨細(xì)胞株MC3T3-E1細(xì)胞增殖、分化和鈣化的影響。 方法： 以成骨細(xì)胞株MC3T3-E1細(xì)胞為體外藥效的試驗(yàn)?zāi)Ｐ停ㄟ^CCK-8法觀察各種濃度的柚皮苷溶液對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞增殖能力的影響；通過乳酸脫氫酶(lactic acid dehydrogenase，LDH)細(xì)胞毒性試驗(yàn)觀察各種濃度的柚皮苷溶液對(duì)細(xì)胞毒性能力的影響

3、。通過骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2，BMP-2，堿性磷酸酶(Alkali phosphme，ALP)活性測(cè)定和骨鈣素(Osteocalin)含量測(cè)定觀察柚皮苷溶液對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞分化能力的影響；通過Von kossa鈣化染色法觀察柚皮苷溶液對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞鈣化能力的影響。 結(jié)果： CCK-8法結(jié)果表明：高濃度的柚皮苷溶液在12h和24h時(shí)能促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞的

4、增殖作用。而低濃度的柚皮苷溶液則無此作用。但是48h時(shí)各個(gè)濃度的柚皮苷溶液均不能促進(jìn)細(xì)胞增殖。細(xì)胞毒性測(cè)定(LDH test)結(jié)果表明：所測(cè)的各個(gè)組別細(xì)胞毒性百分比都較小，且隨著時(shí)間的推移(12h，24h，48h)變化較小。光鏡下觀察各個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的密度和形態(tài)也未發(fā)生明顯的變化。 BMP-2細(xì)胞免疫化學(xué)結(jié)果表明：24h時(shí)，所選取的三組柚皮苷濃度10UM，1UM，0.1UM包漿內(nèi)棕色著色比對(duì)照組明顯。12h時(shí)，柚皮苷作用組和對(duì)照組

5、無明顯區(qū)別。48h時(shí)所得的結(jié)果與24h的結(jié)果相似。 ALP檢測(cè)結(jié)果表明：48h時(shí)，1UM和0.1UM的柚皮苷溶液可提高M(jìn)C3T3細(xì)胞的ALP活性(P<0.05)。72h時(shí)，0.1UM的柚皮苷溶液可提高M(jìn)C3T3細(xì)胞的ALP活性(P<0.05)。 OC檢測(cè)結(jié)果表明：4d和8d時(shí)，三組柚皮苷溶液作用組與對(duì)照組相比OC活性都有所提高，雖然未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而12d時(shí)，10UM和1UM柚皮苷溶液作用組與對(duì)照組相比OC活性明顯提高