小鼠Tim-2基因在L929細(xì)胞表達(dá)后促進(jìn)鐵蛋白的內(nèi)吞.pdf

1、本研究分為二部分：第一部分：小鼠Tim-2基因在L929細(xì)胞表達(dá)后促進(jìn)鐵蛋白的內(nèi)吞。
　　 目的：獲取BALB/c小鼠T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-2（T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules-2，Tim-2）基因，構(gòu)建真核表達(dá)載體在L929細(xì)胞中表達(dá)并研究其功能。
　　 方法：RT－PCR獲取BALB/c小鼠Tim-2基因，T-A克隆后經(jīng)測

2、序鑒定后酶切，插入pEGFP-N1真核表達(dá)載體，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染L929細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察外源基因的表達(dá),然后加入鐵蛋白與轉(zhuǎn)染細(xì)胞作用。
　　 結(jié)果：外源基因在L929細(xì)胞中得到高效表達(dá)，熒光顯微鏡的結(jié)果顯示，外源基因定位于細(xì)胞膜上，并能促進(jìn)細(xì)胞對鐵蛋白的內(nèi)吞。
　　 結(jié)論：Tim-2基因在真核細(xì)胞中表達(dá)后定位于細(xì)胞膜上，并促進(jìn)細(xì)胞對鐵蛋白的內(nèi)吞。
　　 第二部分：昆明小鼠Tim-2基因的單個核苷酸變異的研究。

3、>　　 目的：研究T細(xì)胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白（T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecules，Tim）基因家族的成員之一――Tim-2基因在昆明鼠體內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性，以提示昆明鼠在腫瘤學(xué)和免疫學(xué)的相關(guān)試驗(yàn)中有可能出現(xiàn)的與國際通用的其它品系小鼠（如BALB/c小鼠）不同的生物學(xué)特性。
　　 方法：取不同來源的五只昆明小鼠的肝組織，提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄得

4、到cDNA，使用特異性引物通過PCR擴(kuò)增得到Tim-2基因，克隆后測序，然后比較測序圖譜。
　　 結(jié)果：測序結(jié)果與Genebank中的Tim-2序列相比，451（TCC→GCC:絲氨酸→丙氨酸），502，504（CCA→TCT:脯氨酸→絲氨酸），586，587（GAT→TCT:天冬氨酸→絲氨酸）。其他變異位點(diǎn)無氨基酸改變。
　　 結(jié)論：提示昆明小鼠與國際通用的其它品系小鼠（如BALB/c小鼠）Tim-2基因所編碼的蛋白質(zhì)