干細(xì)胞因子受體在骨質(zhì)疏松癥小鼠骨組織中表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測干細(xì)胞因子受體（c-Kit）在骨質(zhì)疏松癥小鼠骨組織中的表達(dá)，初步探尋c-Kit在骨質(zhì)疏松癥發(fā)病中的作用，為進(jìn)一步探尋骨質(zhì)疏松癥的防治方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動物及分組：選取30只3月齡雄性SPF級C57BL/6J小鼠，體重30±5g。隨機(jī)分為3組：A組：正常組（10只），給予生理鹽水90ml/kg灌胃，每日1次，連續(xù)14日；B組：骨質(zhì)疏松組（10只），給予維甲酸90mg/kg灌胃

2、，每日1次，連續(xù)14日；C組：骨質(zhì)疏松基礎(chǔ)治療干預(yù)組（10只），給予維甲酸90mg/kg、葡萄糖酸鈣1g/kg灌胃，維生素D3注射液0.025ug/Kg皮下注射，每日1次，連續(xù)14日。造模結(jié)束后取材。
　　2.研究方法：通過Micro-CT掃描檢測骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)目、骨小梁厚度、骨小梁分離度等骨質(zhì)量和骨形態(tài)相關(guān)參數(shù)。通過組織病理學(xué)切片觀察骨形態(tài)學(xué)變化。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，利用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察c-Kit受體在小鼠骨組織

3、中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，計(jì)數(shù)資料描述使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x?s）表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)或單因素方差的方法進(jìn)行分析，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1. MicroCT掃描小鼠股骨結(jié)果顯示：
　　C組骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨小梁數(shù)目（TB.N）低于A組，高于B組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C組骨小梁厚度（TB.Th）明顯低于A組，高于B組，差異

4、均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。骨小梁分離度（TB.SP）B組較A組明顯增加，且高于C組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.組織病理切片HE染色結(jié)果：
　　A組小鼠股骨上端骨密質(zhì)較厚且均勻，骨小梁均勻，骨結(jié)構(gòu)緊密，連續(xù)性較好。B組小鼠骨密質(zhì)變薄，骨細(xì)胞變少且排列紊亂，骨小梁變薄、稀疏、纖細(xì)、斷裂，骨髓腔擴(kuò)大。骨質(zhì)疏松基礎(chǔ)藥物治療后C組小鼠股骨骨密質(zhì)較B組明顯增厚，骨小梁連續(xù)、變粗、變密。
　　3.組織病理

5、切片Masson染色結(jié)果顯示：
　　B組與 A組相比較，軟骨及骨質(zhì)膠原著色狀況無明顯改變，可見骨小梁連接性差、分離度大。C組的新生骨基質(zhì)較B組明顯增多，骨形成活躍，軟骨及膠原纖維呈藍(lán)色，骨質(zhì)呈藍(lán)色間雜以紅色條塊，新生骨質(zhì)內(nèi)紅染少，成熟骨內(nèi)紅染較多。
　　4. c-Kit在小鼠骨組織中的表達(dá)：
　　免疫組化結(jié)果采用半定量積分法判定，陽性細(xì)胞比例×陽性細(xì)胞染色評分=免疫組化評分，陽性表達(dá)得分≥2，陰性表達(dá)得分<2。A組骨細(xì)

6、胞可見多處密布存在的c-Kit表達(dá)陽性細(xì)胞，顏色呈棕黃色至棕褐色。B組骨細(xì)胞可見極少量的淺黃色的c-Kit表達(dá)陽性細(xì)胞，而C組可見散在分布的c-Kit表達(dá)陽性細(xì)胞，顏色多為棕黃色顆粒。B組c-Kit在骨細(xì)胞中的表達(dá)與A組相比較明顯降低（P＜0.05）、與C組相比較明顯降低（P＜0.05），C組c-Kit在骨細(xì)胞中的表達(dá)與A組相比較明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. c-Kit在正常小鼠骨組織中有表達(dá)，骨質(zhì)疏松癥