非綜合征型唇腭裂易感基因TGFβ3、IRF6、MSX1在胚胎時(shí)期的表達(dá)研究.pdf

1、目的：觀察非綜合征型唇腭裂易感基因TGFβ3、IRF6、MSX1在小鼠胚胎唇和腭形成時(shí)期的表達(dá)情況，探索其在腭裂畸形中的作用機(jī)制，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.建立維甲酸誘導(dǎo)小鼠腭裂模型，在C57BL/6N孕鼠第10個(gè)妊娠日(Gestation day,GD),實(shí)驗(yàn)組按照100mg/kg體重對(duì)孕鼠進(jìn)行維甲酸一次性灌胃，對(duì)照組給予等體積植物油。分別于GD12天、GD13天、GD14天、GD15天，脫頸

2、處死孕鼠，剖宮取胚鼠。
　　2.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction, QRT-PCR）技術(shù)和免疫組化的技術(shù)方法檢測(cè)TGFβ3、IRF6、MSX1基因在胚胎GD12天、GD13天、GD14天、GD15天mRNA和蛋白的表達(dá)和分布情況。
　　結(jié)果：
　　1.mRNA表達(dá)：TGFβ3 mRNA的表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)組中各組與GD12天相比，其他各組

3、均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），對(duì)照組中各組與GD12天相比，其他各組均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，其中GD14天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。IRF6 mRNA的表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)組中各組與GD12天相比，其他各組均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），對(duì)照組中各組與GD12天相比，其他各組均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，除GD15天實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組外

4、，其他各組均低于對(duì)照組，其中GD14天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。MSX1 mRNA的表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)組中各組與GD12天相比，其他各組均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），對(duì)照組中各組與GD12天相比，除GD13天降低，其他各組均升高，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，除GD15天外，實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，其中GD13天、GD14天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　2.蛋白表達(dá)：TGFβ3蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中各組與G

5、D12天相比，其他各組均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），對(duì)照組中各組與GD12天相比，其他各組均升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，除GD13天外其他各組均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。IRF6蛋白表達(dá)：實(shí)驗(yàn)組中各組與GD12天相比，其他各組均升高，除GD14天其他各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），對(duì)照組中各組與GD12天相比，其他各組均升高，除GD15天其他各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

6、p<0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，除GD15天實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組外，其他各組均低于相應(yīng)對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。MSX1蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中各組與GD12天相比，其他各組均升高，除GD15天其他各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），對(duì)照組中各組與GD12天相比，除GD14天升高差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他兩組均降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，除GD12天其他個(gè)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0