膀胱上皮細(xì)胞與致病菌相互作用及其抗菌機(jī)理的研究.pdf

1、機(jī)體的免疫系統(tǒng)分為天然免疫和獲得性免疫，它們共同作用使得機(jī)體在復(fù)雜的外環(huán)境中維持正常生命過程，其中天然免疫這個(gè)古老的免疫系統(tǒng)在對(duì)抗病原微生物感染過程中的作用日益引起人們的關(guān)注。上皮細(xì)胞是天然免疫的重要組成部分，也是機(jī)體抵御外來致病菌的首要防線。上皮細(xì)胞有復(fù)雜的免疫防御及炎癥反應(yīng)機(jī)制，涉及一系列復(fù)雜的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)及調(diào)控機(jī)制。致病菌與上皮細(xì)胞長期接觸，相互之間形成了復(fù)雜的入侵與抗感染機(jī)制。 尿路致病性大腸桿菌是引起尿路反復(fù)

2、感染的主要致病菌。尿路感染被認(rèn)為是急性的、自限性疾病。首次發(fā)作之后，可在數(shù)月內(nèi)反復(fù)發(fā)生。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)都表明，尿路致病性大腸桿菌可以誘發(fā)尿路感染。本實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察大腸桿菌進(jìn)入膀胱上皮細(xì)胞后，在細(xì)胞內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化，以了解膀胱粘膜天然免疫抵御微生物入侵的作用。實(shí)驗(yàn)中使用了299和K12兩株細(xì)菌大腸桿菌，感染人膀胱移形上皮細(xì)胞　T24，在實(shí)驗(yàn)的4、24、48小時(shí)，用TritonX—100裂解細(xì)胞，裂解液涂布細(xì)菌培養(yǎng)平板，計(jì)數(shù)菌落。結(jié)果表明，

3、隨著時(shí)間的推移，胞內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量顯著減少，說明膀胱上皮細(xì)胞在清除大腸桿菌方面，可以積極發(fā)揮防御功能。這可能是機(jī)體抵御微生物入侵的一個(gè)重要防御機(jī)制。 微生物的致病機(jī)制十分復(fù)雜，涉及到微生物與機(jī)體雙方的相互作用。在感染性疾病的發(fā)病中，機(jī)體的免疫和炎癥反應(yīng)是重要環(huán)節(jié)。肺炎克雷伯桿菌（Klebsiella pneumoniae，KP）是一種條件致病菌，當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)，能引起疾病的發(fā)生。從尿路到呼吸道，肺炎克雷伯桿菌感染的發(fā)病率都很

4、高。肺炎克雷伯桿菌有較厚的莢膜，其毒力因子的研究多集中在LPS和莢膜與侵襲力的關(guān)系上。本課題研究中，肺炎克雷伯桿菌臨床分離株03183與膀胱移形上皮細(xì)胞T24共同孵育2小時(shí)后，分別在4、24、48及72小時(shí)用TritonX-100裂解細(xì)胞，釋放出細(xì)胞內(nèi)的活細(xì)菌，用平板菌落計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)胞內(nèi)活菌數(shù)。結(jié)果表明，肺炎克雷伯桿菌03183在膀胱上皮細(xì)胞T24內(nèi)能夠呈少量生長趨勢，但48小時(shí)之后細(xì)胞內(nèi)活細(xì)菌開始減少。 TNF-α和INF-γ

5、是的炎癥細(xì)胞因子，也是調(diào)節(jié)天然免疫的重要介質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)用肺炎克雷伯桿菌03183感染T24細(xì)胞，再加入TNF-α和INF-γ與細(xì)胞作用，分別于細(xì)菌感染后的4小時(shí)及24小時(shí)裂解細(xì)胞，釋放出細(xì)胞內(nèi)的活細(xì)菌，用平板菌落計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)胞內(nèi)活菌數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TNF-α和INF-γ聯(lián)合作用能夠顯著促進(jìn)T24細(xì)胞清除胞內(nèi)的肺炎克雷伯桿菌。 中性粒細(xì)胞在吞噬病原體后，激發(fā)胞內(nèi)氧化酶，攝取大量氧，代謝極為旺盛，并產(chǎn)生一組強(qiáng)殺菌物質(zhì)（H<,2>O<,2

6、>，超氧陰離子，單態(tài)氧，游離羥基等），這種劇烈的生物氧化現(xiàn)象稱為呼吸爆發(fā)（respiratory brust）。T24細(xì)胞的殺菌機(jī)制是否與細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）和活性氮（RNI）升高有關(guān)。實(shí)驗(yàn)中我們分別使用超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）及一氧化氮合酶抑制劑（L-NAME），探討活性氧和活性氮是否與TNF-α和INF-γ刺激的膀胱上皮細(xì)胞抗菌作用相關(guān)。結(jié)果表明，使用過氧化氫酶（CAT），細(xì)胞內(nèi)活的肺炎克雷伯桿菌數(shù)量明顯增