KCNJ5基因變異與腎上腺腺瘤及增生分子機制研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性醛固酮增多癥是繼發(fā)性高血壓的一種類型，其中腎上腺皮質(zhì)腺瘤和腎上腺增生是原發(fā)性醛固酮增多癥中的兩種類型。研究發(fā)現(xiàn)腎上腺腺瘤中一種編碼G-蛋白偶聯(lián)（門控）內(nèi)向整流鉀離子通道4（G protein-coupled inwardly-rectifying potassium channels4，即KCNJ5）的基因突變可導致KCNJ5通道異常，導致醛固酮合成增加，血壓升高。越來越多的研究正在對腎上腺瘤的發(fā)病機制進行深入研

2、究，以期闡明其發(fā)病機制。本研究擬對收集的新疆腎上腺腺瘤患者及腎上腺增生患者進行研究，對KCNJ5基因突變與腎上腺腺瘤及增生發(fā)病分子機制做初步研究。
　　方法:
　　(1)收集2008年～2011年確診的腎上腺腺瘤病例46例、腎上腺增生病例14，統(tǒng)計基本臨床資料（年齡、民族、性別、血漿醛固酮及腎素水平，血鉀，尿鉀等濃度）。收集手術腎上腺腺瘤及增生組織標本，腺瘤旁的正常腎上腺組織作為對照。
　　(2)提取腎上腺腺瘤及腎上腺

3、增生組織、對照組織DNA，并對KCNJ5基因1、2、3外顯子及其啟動子區(qū)進行PCR擴增并測序，使用分析軟件分析測序結(jié)果，并將測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫進行比較，發(fā)現(xiàn)突變位點。
　　(3)根據(jù)測序結(jié)果，選取有突變的8例標本，野生型的9例標本，以及腫瘤周邊正常組織7例，運用PCR Arrary篩查選定的離子通道基因表達情況。
　　結(jié)果：
　　(1)測序發(fā)現(xiàn)41.3％的APA(19/46)腫瘤組織中存在突變，其中錯義突變19例

4、，G151R突變5例(10.8%)，L168R突變4例(8.7%)，S209T12例(26.1)（兩例與G151R、L168R共存），同義突變13例，其中2例L270，2例H278，9例S57。另外還發(fā)現(xiàn)-20210G/C、5521T/A、rs11221498、rs11221497、rs45516097、rs72542772、rs4937391、rs3867256、rs4373934、rs2604204等10個SNP位點，其中-2021

5、0G/C和5521T/A2個是新發(fā)現(xiàn)的變異位點。
　　(2)腎上腺腺瘤患者KCNJ5 G151R、 L168R、S209T突變組與野生型組比較，收縮壓、舒張壓、血鉀濃度在兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；尿鉀離子濃度、病程、腫瘤直徑等臨床表型差異無統(tǒng)計學意義。
　　(3)測序發(fā)現(xiàn)57.1%的腎上腺增生患者(8/14)增生組織中存在突變，G151R突變2例(14.2)%，L168R突變1例(7.1%)，5例S209T(

6、35.7%)。同義突變4例，其中2例L270，2例H278。發(fā)現(xiàn)5個SNP位點，其中-5521T/A為新發(fā)現(xiàn)的突變位點。
　　(4)腎上腺增生患者KCNJ5 G151R、 L168R、 S209T突變組與野生型組比較，收縮壓、舒張壓、血鉀濃度、尿鉀濃度、坐位醛固酮水平等臨床表型差異無統(tǒng)計學意義。
　　(5)PCR Array顯示KCNJ5突變的腎上腺腺瘤中與對照組比較，KCNJ6、KCNJ5、SCN1A2、SCN1A、CAC

7、NB1、KCNH7等29個基因上調(diào)，SCN10A、TRPV4等7個基因下調(diào)。KCNJ5野生型腎上腺腺瘤與對照組比較，SCN10A、KCNJ5、KCNJ15、 TRPV4、CACNB1等13基因上調(diào)，CACNA1B、KCNJ6、KCNJ1、 TRPV1、KCNJ14、 TRPV3等7個基因下調(diào)。
　　結(jié)論：
　　(1)本研究在腎上腺腺瘤G151R與L168R突變，首次發(fā)現(xiàn)新的錯義突變S209T，同時在腎上腺增生組織中也發(fā)現(xiàn)了上