KCNJ5基因變異與原發(fā)性醛固酮增多癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：原發(fā)性醛固酮增多癥是體內(nèi)醛固酮自主分泌增多導(dǎo)致腎素分泌受抑制的臨床綜合征。既往認為其患病率低，對靶器官的損害較輕。近年來隨著對原發(fā)性醛固酮增多癥研究的深入，人們對原發(fā)性醛固酮增多癥的認識有了很大轉(zhuǎn)變。目前研究表明其在高血壓人群中的患病率高達10％左右，其靶器官損害較原發(fā)性高血壓嚴重，對人類健康危害較大。探明原發(fā)性醛固酮增多癥的病因和發(fā)病機制，有利于早期正確的診斷和治療原發(fā)性醛固酮增多癥，減少并發(fā)癥并改善預(yù)后。醛固酮異常增多是原發(fā)性

2、醛固酮增多癥的主要特征，探討原發(fā)性醛固酮增多癥患者醛固酮增多的內(nèi)在機制有助于進一步闡明原發(fā)性醛固酮增多癥的病因和發(fā)病機制。醛固酮主要在腎上腺皮質(zhì)球狀帶由膽固醇經(jīng)過一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)合成，其合成主要受血管緊張素II和血清K+濃度的調(diào)節(jié)。研究顯示在鉀離子對醛固酮合成的的調(diào)節(jié)通路中，鉀離子通道起著重要的作用。內(nèi)向整流鉀通道 J亞家族成員5（potassium inwardly-rectifying channel，subfamily J，m

3、ember5，KCNJ5）屬于G蛋白敏感的內(nèi)向整流鉀通道家族，有研究表明腺瘤組織中的KCNJ5基因變異G151R和L168R與醛固酮腺瘤相關(guān)，而家系的KCNJ5基因變異T158A和G151E與家族性高醛固酮血癥-III的發(fā)病可能有關(guān)，但對基因組KCNJ5基因變異與散發(fā)原發(fā)性醛固酮增多癥患者的關(guān)系尚未見報道。本研究將在臨床研究的基礎(chǔ)上，進行基因組KCNJ5基因變異與散發(fā)原發(fā)性醛固酮增多癥患者的關(guān)聯(lián)研究，為從分子遺傳學(xué)水平闡明原發(fā)性醛固酮增

4、多癥的病因和發(fā)病機制提供依據(jù)，并為原發(fā)性醛固酮增多癥的診斷和治療提供新的線索和思路。
　　方法：（1）首先對2006年～2010年確診的資料完整的原發(fā)性醛固酮增多癥患者439例進行臨床研究，分析其臨床特點；（2）在臨床研究的基礎(chǔ)上，選取96例臨床表現(xiàn)典型的原發(fā)性醛固酮增多癥患者進行測序，采用 PCR產(chǎn)物測序方法篩查KCNJ5基因啟動子區(qū)、外顯子區(qū)、內(nèi)含子-外顯子交界區(qū)以及3'-非翻譯區(qū)的序列變異位點，根據(jù)連鎖不平衡分析結(jié)果結(jié)合最小

5、等位基因頻率選擇代表性變異位點；（3）將2010年連續(xù)進行篩查確診為原發(fā)性醛固酮增多癥的患者235例作為病例組，將經(jīng)過系統(tǒng)篩查除外繼發(fā)性高血壓確診為原發(fā)性高血壓的患者913例作為對照組，利用TaqMan基因分型技術(shù)分別對入選樣本進行 KCNJ5基因代表性 SNPs進行基因型鑒定。采用候選基因關(guān)聯(lián)研究方法，分析KCNJ5基因代表性變異基因型在原發(fā)性醛固酮增多癥組及原發(fā)性高血壓組中的分布情況，分別探討單個SNP位點及其構(gòu)成的單體型與原發(fā)性醛

6、固酮增多癥及原發(fā)性高血壓的相關(guān)性。此外，分析了KCNJ5基因代表性變異基因型在原發(fā)性醛固酮增多癥單、雙側(cè)病變組的分布情況，并探討了KCNJ5基因代表性變異與原發(fā)性醛固酮增多癥單、雙側(cè)病變組的相關(guān)性；（4）采用SPSS l6.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理?？ǚ綑z驗用于計數(shù)資料的關(guān)聯(lián)分析，t檢驗或ANOVA分析用于兩組或兩組以上連續(xù)性變量的比較，Logistic回歸分析用于多因素資料中篩查獨立患病危險因素及計算優(yōu)勢比；同時運用SNP alyzer7

7、.0軟件進行Hardy-Weinberg平衡檢驗并分析多個位點之間的連鎖不平衡關(guān)系和代表性 SNP的選取，并進行 KCNJ5基因多態(tài)位點單體型的構(gòu)建和分析。
　　結(jié)果：（1）原發(fā)性醛固酮增多癥患者中超重、肥胖者占79%，青、中年患者占89.5%，2級以上高血壓患者占96.5%，進一步按性別分組表明：超重肥胖組中男性明顯多于女性（χ2=32.075，P<0.001）。原發(fā)性醛固酮增多癥患者血清鉀水平平均為（3.67±0.41）mmo

8、l/L，低血鉀的患病率為30.8%；（2）96例原發(fā)性醛固酮增多癥患者進行KCNJ5基因測序，共篩查16個變異位點，其中有2個位點為新發(fā)現(xiàn)的變異位點，但頻率較低。計算各位點間連鎖不平衡系數(shù)，挑選出4個SNPs分別是啟動子區(qū)的rs11221497（-20559G/C），外顯子2區(qū)的rs6590357（171C/T），內(nèi)含子2區(qū)的rs4937391（5126G/A），3'-UTR區(qū)的rs2604204（6262T/G），另外使用Haplov

9、iew軟件挑選1個TagSNPs，為內(nèi)含子1區(qū)的rs3740835（-10811 C/A）；（3）rs6590357變異的三種基因型CC、CT和TT，其頻率分別為77.9%、20.3%、1.8%和75.4%、23.7%、0.9%；C和T兩種等位基因頻率分別為88.1%、11.9%和89.1%、10.9%；rs3740835變異的三種基因型AA、AC和CC，其基因型頻率分別為4.6%、32.4%、63%和3%、31.9%、65.1%；A和

10、G兩種等位基因頻率分別為20.8%、79.2%和18.9%、81.1%；rs11221497變異的三種基因型CC、GC和GG，頻率分別為1%、21%、78%和0.4%、18.8%、80.8%；C和G兩種等位基因頻率分別為11.5%、88.5%和9.8%、90.2%，原發(fā)性醛固酮增多癥與原發(fā)性高血壓患者相比，上述三個變異位點的基因型、顯性模型、隱性模型以及等位基因頻率的分布均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。rs4937391變異的三種基因型

11、AA、AG和GG，其基因型頻率分別為45.2%、43%、11.8%和39.9%、42.1%、18%；A和G兩種等位基因頻率分別為66.6%、33.4%和60.9%、30.1%；rs2604204變異的三種基因型AA、AC和CC，其基因型頻率分別為46.4%、42.3%、12.3%和40.6%、41.5%、17.9%；A和C兩種等位基因頻率分別為67.5%、32.5%和61.3%、38.7%，原發(fā)性醛固酮增多癥與原發(fā)性高血壓患者相比，除顯

12、性模型外，其基因型、隱性模型以及等位基因頻率的分布均存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。在校正了混雜因素性別、年齡、吸煙、飲酒和BMI后，Logistic回歸分析結(jié)果表明：KCNJ5基因rs4939391變異的GG基因型和rs2604204變異的CC基因型增加原發(fā)性醛固酮增多癥患者的發(fā)病風(fēng)險（前者 OR=1.697，95%可信區(qū)間1.111-2.593，P=0.014；后者OR=1.784，95%可信區(qū)間1.166-2.728，P=0.00

13、8）。KCNJ5基因的5個變異位點（rs6590357、rs4937391、rs3740835、rs2604204和rs11221497）構(gòu)建的6個常見單體型中，僅單體型H4（C-A-C-A-C）的頻率在原發(fā)性醛固酮增多癥患者是明顯低于原發(fā)性高血壓患者的（6.2 vs9.1%，P＜0.05）。
　　結(jié)論：原發(fā)性醛固酮增多癥多發(fā)于中青年，尤其多見于超重肥胖男性，主要表現(xiàn)為高血壓，且以中重度高血壓為主，僅約1/3的患者出現(xiàn)低血鉀。因此

14、，中青年、超重肥胖尤其是男性以及中重度的高血壓患者，無論是否伴有低血鉀均應(yīng)重視原發(fā)性醛固酮增多癥的篩查。原發(fā)性醛固酮增多癥患者KCNJ5基因測序共篩查16個變異位點，其中有2個新發(fā)現(xiàn)的變異位點。KCNJ5基因的rs4937391和rs2604204變異位點可能與散發(fā)原發(fā)性醛固酮增多癥相關(guān)，而rs6590357，rs3740835和rs11221497變異位點可能與散發(fā)原發(fā)性醛固酮增多癥無關(guān)；KCNJ5基因的rs4937391變異位點GG