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文檔簡介
1、背景:本課題組在前期一個(gè)國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目的研究中發(fā)現(xiàn):KLK7在有或無間質(zhì)共培養(yǎng)的良性前列腺增生上皮細(xì)胞中差異表達(dá)KLK7編碼的蛋白為hK7。hK7與PSA都是分泌性、具有糜蛋白酶樣活性的絲氨酸蛋白酶,兩者的編碼基因都屬于kallikrein基因家族,hK7最早被報(bào)道在皮膚角質(zhì)層中表達(dá),可促進(jìn)皮膚脫屑過程。其主要機(jī)制是hK7通過降解細(xì)胞間的連接結(jié)構(gòu),降低細(xì)胞附著力,從而使表皮細(xì)胞脫落。腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的起點(diǎn)或者說重要環(huán)節(jié)之一就是
2、首先癌細(xì)胞從原發(fā)部位脫落。hK7對前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移等惡性表型是否有影響,目前尚未見有報(bào)道。目的:研究hK7對前列腺癌細(xì)胞惡性表型的影響,探索hK7的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法: 1.首先利用基因克隆等分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建hK7的重組表達(dá)載體pcDNA3.1-KLK7: 2.然后重組載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞系22RV1及DUl45,在前列腺癌細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)hK7蛋白,獲得的研究對象用于表型測定和觀察; 3.最后
3、,測定并觀察hK7對前列腺癌細(xì)胞系生長、侵襲、克隆形成能力和細(xì)胞形態(tài)等腫瘤相關(guān)表型的影響。 結(jié)果: 1.成功構(gòu)建hK7的重組表達(dá)載體; 2.在前列腺癌細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)hK7; 3.表達(dá)hK7對前列腺癌細(xì)胞系生長增殖無顯著影響; 4.表達(dá)hK7對DU145體外形成克隆的個(gè)數(shù)無明顯影響; 5.hK7顯著增強(qiáng)DU145體外侵襲基質(zhì)膠的能力; 6.初步結(jié)果表明,hK7促使DU145發(fā)生類上
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