兔異體血清及組織提取物對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化作用的研究.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(msenchymalstemcells，MSCs)是一種具有自我更新和多分化潛能的成體干細(xì)胞，并且由于較低的免疫原性，它將在細(xì)胞治療和組織工程上擁有越來越廣闊前景。尋找合適的胎牛血清替代物，在體外優(yōu)質(zhì)高效地?cái)U(kuò)增人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，避免動物病毒污染是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)以兔為模型，初步探索了利用異體血清替代胎牛血清培養(yǎng)MSC的方法和效果。 本實(shí)驗(yàn)成功地培養(yǎng)了兔子骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。通過脛骨結(jié)節(jié)，股骨大轉(zhuǎn)子和股骨下

2、端等部位穿刺，取得了足夠數(shù)量的骨髓，用密度梯度離心法和全血法分離，用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基懸浮，在37℃，含5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。15天左右得到了集落匯合的原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，一直被傳到20代。本實(shí)驗(yàn)還比較了來自成年兔和新生兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長曲線，認(rèn)為來自新生兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞所需倍增時(shí)間顯著低于成年兔細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)，茜紅素S染色成陽性，并能在腦組織提取物誘導(dǎo)下分化為神經(jīng)樣細(xì)

3、胞，證明細(xì)胞保持了多向分化能力。 本實(shí)驗(yàn)初步探索了利用異體血清替代胎牛血清培養(yǎng)MSC的方法。5個(gè)成年新西蘭大白兔頸動脈放血，4℃冰箱過夜后收集混合的異體清。用硫酸銨沉淀法去除了清中的抗體IgG，又用透析法除去了硫酸銨，并且加熱滅活了補(bǔ)體。本文用含10％兔異體血清的DMEM培養(yǎng)基成功地培養(yǎng)了原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。細(xì)胞傳至12代后才喪失分裂能力。這種細(xì)胞同樣保持了成骨細(xì)胞和神經(jīng)樣細(xì)胞的分化潛能。本實(shí)驗(yàn)還比較了兔自體血清，異體血清和胎

4、牛血清對細(xì)胞增殖的差異，認(rèn)為在自體血清作用下，MSC倍增時(shí)間最短，而胎牛血清和異體血清之間不存在顯著差異。沒有經(jīng)過抗體去除和補(bǔ)體滅活的異體血清不能支持MSC增殖。本實(shí)驗(yàn)還探索了新生兔多種組織提取物，包括肝臟，腦，心臟，腎臟，脾，和胸腺對MSC增殖和分化作用。各種組織在冰浴勻漿后，4000r/min離心5min收集上清，用無血清DMEM培養(yǎng)基稀釋成200ug/ml，過濾除菌后添加5％胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)。結(jié)果顯示肝組織提取物能促進(jìn)MSC的