腺苷A2A受體介導的效應對小鼠慢性低灌注白質損傷的影響和精神運動行為的調控作用.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分、腺苷A2A受體介導的效應對小鼠慢性低灌注白質損傷的影響
　　背景：慢性低灌注性白質損傷的主要病理改變?yōu)榘踪|神經纖維髓鞘潰變、軸索變性、小膠質細胞和星形膠質細胞增生，而其分子病理機制仍然不明確，對于慢性腦血流低灌注導致的腦組織能量代謝和神經活性物質代謝障礙通過哪些途徑造成以白質損傷為主的病理損害仍然缺乏清楚認識。以往研究發(fā)現(xiàn)，慢性腦血流低灌注造成的白質損傷，同時伴隨有白質炎細胞浸潤或增生、某些

2、炎性因子表達增加以及NO合成增加等，提示白質損傷與炎性病理過程有關。腺苷是能量代謝的中間產物，也是中樞神經系統(tǒng)重要的神經調質。腺苷與其受體（A1、A2A、A2B和A3）結合后調節(jié)機體重要的生理活動，并參與多種致病因素引起的疾病過程。其中A2A受體參與機體多種生理活動的調節(jié)和某些疾病的病理過程，在某些疾病的動物模型實驗研究中發(fā)現(xiàn)以A2A受體為靶點的藥物治療效應較明確，因此格外受到重視。研究已發(fā)現(xiàn)阻斷腺苷A2A受體對急性缺血性腦損傷的保護作

3、用是由于抑制了細胞外谷氨酸濃度的異常升高，從而降低谷氨酸對神經組織的興奮性毒性。然而，本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，與在急性腦缺血動物模型觀察到的結果相反，腺苷A2A受體基因敲除加重慢性低灌注導致的白質纖維損傷，白質區(qū)域小膠質細胞增生及活化，外周炎細胞浸潤。研究結果表明腺苷A2A受體介導的效應是影響慢性低灌注白質損傷結局的重要因素，阻斷腺苷A2A受體加重慢性低灌注白質損傷，但對其機制仍然不清楚。本研究在慢性低灌注小鼠模型觀察了腺苷A2A受體激動

4、劑對白質損傷、白質區(qū)域小膠質細胞增生和炎細胞浸潤的影響，試圖進一步確定腺苷A2A受體介導的效應與白質損傷及其炎性病理過程的關系。
　　方法：參照Shibata等方法，采用內徑為0.18mm的微型彈簧圈套雙側頸總動脈建立C56BL/6小鼠慢性腦血流低灌注模型，激光多普勒血流儀監(jiān)測小鼠建模前后局部腦血流的變化。建模后每日給予腺苷A2A受體激動劑CGS21680（0.5mg/kg/d,ip）直至各觀察截止時點，相同容積載體溶液作為對照。

5、建模后25d，采用Morris水迷宮評價小鼠認知功能損害情況。分批于建模后14d、30d和45d取腦標本冰凍連續(xù)冠狀位切片，Kluver-Barrera染色和Bielschowsky銀染，抗MBP、抗CD11b、抗CD3和抗LY-6G免疫組織化學染色，觀察在建模后不同時點白質區(qū)域的神經纖維損傷程度、小膠質細胞增生以及外周炎細胞浸潤情況。
　　結果：
　?、俨捎锰刂莆⑿蛷椈扇μ仔∈箅p側頸總動脈成功建立慢性腦血流低灌注模型，圈套

6、雙側頸總動脈后局部腦血流下降29±5.38％，建模后15d、30d和45d組織病理學觀察證實白質神經纖維稀疏、纖維空隙增加和局部空泡形成；
　?、贛orris水迷宮檢測發(fā)現(xiàn)，與載體溶液對照組小鼠比較，接受腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組小鼠的潛伏期明顯延長，但穿越平臺次數(shù)無顯著差異；
　　③各時點組織病理學觀察發(fā)現(xiàn)，腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組白質損傷程度較載體溶液對照組減輕；
　?、芙：?5

7、d組織病理學觀察發(fā)現(xiàn)，兩組動物腦內白質區(qū)域均可見胞體增大變圓、突起變短的活化小膠質細胞，但腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組小膠質細胞數(shù)量明顯較少；
　　⑤建模后30d和45d，免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)載體溶液對照組小鼠胼胝體可見散在分布的CD3陽性淋巴細胞，而在腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組小鼠未見到CD3陽性淋巴細胞分布；
　?、藿：髢山M動物胼胝體、內囊和視束等白質區(qū)域均未見到LY-6G陽性的中性粒細胞

8、。
　　結論：
　　①腺苷A2A受體激動劑CGS21680抑制小鼠運動活性；
　　②腺苷A2A受體激動劑CGS21680減輕慢性腦血流低灌注造成的白質損傷；
　?、巯佘誂2A受體激動劑CGS21680抑制慢性腦血流低灌注誘導的白質區(qū)域小膠質細胞增生和活化；
　　④腺苷A2A受體激動劑CGS21680抑制慢性腦血流低灌注誘導的白質區(qū)域淋巴細胞浸潤；⑤腺苷A2A受體激動劑減輕慢性腦血流低灌注造成的白質損傷與其抑

9、制炎性病理過程有關。
　　第二部分、腺苷A2A受體介導的效應對小鼠精神運動和情緒行為的調控作用
　　目的：探討腺苷A2A受體基因敲除、藥物激活和抑制腺苷A2A受體對小鼠運動活性、焦慮和抑郁樣行為的影響。
　　方法：實驗分為腺苷A2A受體基因敲除組（adenosine A2A receptor knock-out，A2AKO）及同窩野生型（wild-type，WT）小鼠對照組、給予野生型C57BL/6小鼠腺苷A2A受體激

10、動劑CGS21680（0.5 mg/kg，ip）和拮抗劑SCH58261（2mg/kg,ip）及其載體溶液對照組，分別進行曠場實驗、高架十字迷宮實驗和強迫游泳實驗，測定各組小鼠的運動活性、焦慮和抑郁樣行為。
　　結果：
　?、倥c載體溶液對照組比較，CGS21680組曠場總運動路程縮短和在周邊區(qū)域的滯留時間延長（P＜0.01），進入高架十字迷宮開臂的次數(shù)及在開臂的滯留時間減少（P＜0.01），強迫游泳的累計不動時間延長（P＜0

11、.001）；
　　②與載體溶液對照組比較，SCH58261組曠場總運動路程和中心區(qū)域活動路程延長（P＜0.001），強迫游泳的累計不動時間縮短（P＜0.01），高架十字迷宮各項指標無顯著差異（P＞0.05）；
　?、叟cWT組比較，A2AKO組曠場總運動路程縮短（P＜0.001）和在周邊區(qū)域的滯留時間延長（P＜0.05），進入高架十字迷宮開臂的次數(shù)及在開臂的滯留時間減少（P＜0.05），強迫游泳的累計不動時間無顯著差異（P＞0