晚期糖化終產(chǎn)物通過(guò)p38MAPK、JNK、NF-κB途徑促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌TNF-a.pdf

1、目的：研究表明晚期糖化終產(chǎn)物(AGEs)與糖尿病加速動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成有密切關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)AGEs可影響內(nèi)皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞表達(dá)炎癥因子，使細(xì)胞功能紊亂，參與AS的形成。而AGEs對(duì)T細(xì)胞功能影響的研究較少，T細(xì)胞的激活與炎癥因子的表達(dá)在AS的形成中起重要作用，本實(shí)驗(yàn)研究AGEs對(duì)人類(lèi)T細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞(CD4+T細(xì)胞)表達(dá)炎癥因子TNF-a的影響及其信號(hào)機(jī)制，進(jìn)一步了解糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化形成的機(jī)制。

2、
　　 方法：①常規(guī)方法制備AGEs，不同濃度AGEs與牛血清白蛋白(BSA)作用于PHA(0.25μg/ml)預(yù)刺激48h后的Jurkat細(xì)胞24h，MTT法檢測(cè)AGEs對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；②不同濃度AGEs與BSA作用于PHA(0.25μg/ml)預(yù)刺激48h后的Jurkat細(xì)胞24h，ELISA法檢測(cè)AGEs與BSA對(duì)Jurkat細(xì)胞分泌炎癥因子TNF-a的影響；③適當(dāng)濃度的AGEs(200μg/ml)作用于PHA(0.25

3、μg/ml)預(yù)刺激48h后的Jurkat細(xì)胞0、10、20、30、40min，Western-blot檢測(cè)AGEs對(duì)p38、JNK、Akt磷酸化及非磷酸化水平的影響。④Western-blot檢測(cè)信號(hào)通路阻滯劑及N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)對(duì)IκB磷酸化與非磷酸化水平的改變情況。⑤ELISA方法觀察信號(hào)通路阻滯劑及NAC對(duì)AGEs刺激Jurkat細(xì)胞分泌TNF-a的影響。
　　 結(jié)果：①不同濃度AGEs與BSA作用于PHA預(yù)

4、處理的Jurkat細(xì)胞24h后，MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示各濃度AGEs與BSA對(duì)Jurkat細(xì)胞生長(zhǎng)均無(wú)明顯影響(p＞0.05)。②不同濃度AGEs與BSA作用于PHA預(yù)處理的Jurkat細(xì)胞24h后，ELISA法檢測(cè)結(jié)果顯示AGEs(100～400μg/ml)可促進(jìn)Jurkat細(xì)胞上調(diào)炎癥因子TNF-a表達(dá)(p＜0.01)。③200μg/ml的AGEs作用于預(yù)處理的Jurkat細(xì)胞0～40min后，Western-blot結(jié)果顯示AGEs

5、可上調(diào)p-p38、p-JNK表達(dá)，20～30min時(shí)作用明顯，對(duì)p-Akt無(wú)明顯影響。④200μg/ml的AGEs作用于預(yù)處理的Jurkat細(xì)胞30min可明顯上調(diào)p-IκB表達(dá)，p38、JNK抑制劑和NAC能明顯抑制AGEs上調(diào)p-IκB。⑤p38、JNK抑制劑和NAC能明顯抑制AGEs上調(diào)炎癥因子TNF-a。
　　 結(jié)論：AGEs可促進(jìn)PHA預(yù)處理的Jurkat細(xì)胞分泌炎癥因子TNF-a，其機(jī)制與激活p38、JNK，上調(diào)p-