人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞體外生物安全性探討.pdf

1、目的：
　　 人類間充質(zhì)干細(xì)胞(human mesenchymal stem cells，hMSC)因具有自我更新并分化成為多個(gè)胚層不同類型細(xì)胞的潛能，在再生醫(yī)學(xué)和細(xì)胞替代治療中具有重要的作用。體外培養(yǎng)過程中生物安全性的情況是評(píng)價(jià)hMSC治療前景的重要條件。本實(shí)驗(yàn)探討人皮膚來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(human skin-derived mesenchymal stem cells，HSMSCs)的生物安全性，研究在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)條件下其

2、致瘤性、染色體核型及主要組織相容性抗原的表達(dá)情況，為評(píng)估HSMSCs體內(nèi)移植的生物安全性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)HSMSCs觀察其形態(tài)學(xué)變化，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)對(duì)人皮膚來源的基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；
　　 2.流式細(xì)胞儀法(flow cytometer,FCM)通過檢測(cè)人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記對(duì)其進(jìn)行鑒定；
　　 3.做染色體核型檢測(cè)；
　　 4.通過重癥聯(lián)合免疫缺陷(

3、Severe combined immunodeficiency mice,SCID)小鼠體內(nèi)致腫瘤試驗(yàn)對(duì)HSMSCs的致瘤性進(jìn)行研究。觀察受體SCID鼠的一般情況，通過病理組織學(xué)分析檢測(cè)其成瘤性及植入細(xì)胞對(duì)受體各器官的影響；
　　 5.通過RT-PCR和FCM法分別檢測(cè)人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞HLA-I、和HLA-DR的基因和蛋白水平的表達(dá)情況來檢測(cè)其主要組織相容性抗原的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.體外培

4、養(yǎng)的人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞為成纖維樣細(xì)胞、短梭形，細(xì)胞緊密排列呈漩渦狀生長(zhǎng)，并且在傳代過程中細(xì)胞形態(tài)保持不變；
　　 2.HSMSCs與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞一樣穩(wěn)定表達(dá)特異性標(biāo)志CD73、Vimentin、CD105等，不表達(dá)造血系統(tǒng)特異性標(biāo)志CD34、CD45、CD19、CD14等標(biāo)記；
　　 3.體外培養(yǎng)至P11、P21的人皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞核型檢測(cè)結(jié)果正常；
　　 4.在SCID鼠植入模型中，植入體外培養(yǎng)至

5、第11、21代的人皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞后，受體鼠一般狀況良好，解剖大體觀注射部位及各器官無異常變化，作病理檢測(cè)并切片染色，無腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)；
　　 5.體外培養(yǎng)至P21代的人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞RT-PCR檢測(cè)表明不同代數(shù)HLA-I、HLA-DR在mRNA水平均有表達(dá)，而流式法檢測(cè)表明蛋白水平HLA-DR均為陰性表達(dá)，而HLA-I在不同代數(shù)表達(dá)不一致，P10、P11均穩(wěn)定陽性表達(dá)率為29.5％～31.7％，P21為陰性表達(dá)。