YZK復方治療病毒性乙型肝炎的藥理學研究.pdf

1、臨床上化學藥物抗病毒治療的基礎是抑制嗜肝DNA病毒復制，抑制復制可減少模板cccDNA的形成，同時抑制感染細胞中靶抗原的表達，以緩解炎癥應答。清除肝細胞核內cccDNA是對慢性乙肝抗病毒治療取得持續(xù)療效的關鍵。目前聯(lián)合用藥包括聯(lián)合應用抗病毒化合物、免疫調節(jié)、治療用疫苗，以及基因靶向療法。 中藥復方治療肝炎在臨床上應用廣泛，研究表明中藥復方在抗病毒復制、調節(jié)免疫功能、減輕肝細胞損傷、改善肝功能，尤其是抗肝纖維化、防治早期肝硬變多環(huán)

2、節(jié)都能起到作用，綜合療效優(yōu)于單純的西藥。 茵梔苦復方是在茵陳蒿湯基礎上化裁而得，由茵陳、梔子和苦參的三味中藥按比例混合而成。本研究借助2.2.15細胞模型和鴨乙肝動物模型，對茵梔苦復方抗肝炎復方藥效進行了系統(tǒng)評價，并對復方抗肝炎的機理做了初步探討，以拉米呋啶為陽性對照，進行藥物的細胞毒性試驗及對HBsAR、HBeAg抑制試驗，建立了用SyBrgreenI熒光實時定量PCR方法細胞HBVDNA的方法，運用鴨乙肝模型觀察了中藥復方在

3、體內對DHBV-DNA復制的抑制作用，為正確評價藥效建立了簡便價廉的操作方法。 本研究中觀察了茵梔苦復方對2.2.15細胞上清HBsAg和HBeAg的表達量和對HBVDNA的抑制情況。在毒性實驗中，茵梔苦復方對HepG2.2.15細胞的無毒濃度TC0為200mg/ml，TC50為358.5mg/ml。 茵梔苦復方及其組分對2.2.15細胞培養(yǎng)上清液中的HBsAg都存在著不同程度的抑制作用，并呈現基本一致的規(guī)律，抑制率從第

4、一天開始逐漸攀升，于第6天達到最高值，并由此開始下降，其中以復方高劑量為最高，與3TC比較差異顯著。從抑制率的變化趨勢來看，復方高劑量下降最為緩慢，藥效時間維持長久。茵梔苦復方及其組分對2.2.15細胞培養(yǎng)上清液中的HBeAg的抑制作用，只有復方高劑量呈現比較清晰的規(guī)律，與抑制HBsAg的變化規(guī)律基本一致。其它藥物的抑制率都在20％-30％左右波動，藥效不顯著，而且實驗數據不穩(wěn)定.從抑制率的變化趨勢來看，復方高劑量下降較快，藥效時間維持

5、較短。結果顯示復方對HBsAg的抑制作用要強于HBeAg。 含藥血清對2.2.15細胞上清的HBsAg抑制率的影響，其曲線顯示出的規(guī)律也為第六天達到最高峰，此后逐漸下降，但是下降的趨勢明顯比單味藥物作用的要緩，在第12天仍然可測到較高的水平。兩種藥物血清對HBsAg的影響無明顯差異。含藥血清對2.2.15細胞上清分泌的HBeAg抑制率的影響，其曲線顯示出的規(guī)律與HBsAg有所不同，為第六天達到最高峰，但此后無明顯下降，到第12天

6、，抑制率還維持在較高、較穩(wěn)定的水平上。兩種藥物血清對HBeAg的影響無明顯差異。 從實驗結果可以看出，高劑量茵梔苦復方在體外的多項指標方面都發(fā)揮著顯著的作用，與細胞對照組差異顯著，茵梔苦復方對病毒DNA合成的抑制作用隨著劑量的增大而增強，呈量效關系。茵梔苦復方高劑量與拉米呋啶的抑制率接近，拉米呋啶和復方高劑量組比細胞對照的HBV拷貝數少了一個指數級，療效顯著。復方的組分中苦參提取物的抑制效果最強，藥效強度在復方高、低劑量之間，而

7、茵陳提取物未顯示出對HBVDNA的抑制作用，由此可以推斷苦參是茵梔苦復方抗HBVDNA中是起作用的重要組分，同時可以看出復方的療效優(yōu)于三個單一組分(茵陳蒿提取物、梔子提取物和苦參提取物)的藥效，但復方和各組分之間藥效并不是簡單的疊加關系，復方無論高、低劑量藥效強度都要優(yōu)于單味藥。 本研究也用熒光定量方法檢測了含藥血清對HBVDNA的抑制作用，觀察茵梔苦復方在體內代謝后的含藥血清對細胞的病毒復制的影響，從結果可以看出，以未含藥物的

8、陰性血清作為細胞對照，含藥血清對HBV-DNA未顯示明顯的抑制作用。其抑制率均不超過20％。 本研究運用鴨乙肝模型觀察了中藥復方在體內對DHBV-DNA復制的抑制作用。通過口服、腹腔注射兩種給藥途徑，分為病毒組、3T組、低、中、高劑量組，在給藥前(T0)，給藥第5天(T5)、第10天(T10)和停藥后第3天(P3)，計算抑制率，將以不同給藥時間抑制率結果作為重復測量變量進行分析，結果表明不同給藥方式之間有統(tǒng)計學意義，腹腔注射效果

9、好于口服給藥；給藥第5天抑制率與第10天抑制率之間比較有統(tǒng)計學意義，而停藥后3天抑制率與給藥第5天抑制率之間比較無統(tǒng)計學意義。不同藥物組之間陰性對照組和其他各組之間均有統(tǒng)計學意義，高劑量組、中劑量組、低劑量組之間無統(tǒng)計學意義，而陽性對照組除了和高劑量組無統(tǒng)計學意義外，與其他各組均有統(tǒng)計學意義。從以上結果可以看出復方藥物治療組對病毒的抑制是有效果的，腹腔注射效果好于口服給藥，其中高劑量組治療效果和陽性對照組最接近，但與陽性對照組的效果仍有