番茄細(xì)菌性潰瘍病菌血清學(xué)、PCR檢測技術(shù)及其遺傳多樣性的研究.pdf

1、本文針對番茄細(xì)菌性潰瘍病菌(Clavibacter'reichiganensis subsp.michiganensis，簡稱Cmm)的血清學(xué)、PCR檢測方法和該病菌的遺傳多樣性做了了研究，主要研究結(jié)果如下： 用Cmm的菌體蛋白免疫家兔制備出該病菌的特異性抗血清，瓊脂雙向擴(kuò)散法測定其效價為1:80。該抗血清經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、鹽析、葡聚糖凝膠過濾層析純化后能檢測出Cmm的樣品，而不與Clavibacter。michiganense

2、 subsp.Sepedonicum、Clavibactermichiganense subsp.insidiosum發(fā)生反應(yīng)。通過與Agdia公司研制的Cmm的ELISA試劑盒比較，證明該研究的間接ELISA法檢測特異性比ELISA試劑盒要高，時間更短，靈敏度相同，可應(yīng)用于田間檢測或室內(nèi)檢測。 用常規(guī)PCR方法和實時熒光PCR方法分別檢測Cmm菌懸液和田間采集的病組織，結(jié)果表明，常規(guī)PCR方法檢測靈敏度為105cfu/mL；T

3、aqMan探針實時熒光PCR方法檢測檢測靈敏度為103-4cfu/mL,比傳統(tǒng)PCR方法檢測靈敏度(105cfu/mL)提高10-100倍，且不需要瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色和Southern雜交。 用Rep-PCR法分析收集的33個番茄潰瘍病菌菌株，結(jié)果表明，用BOX引物分別擴(kuò)增出8-15條多態(tài)性條帶，分子量大小200-3000bp，大多數(shù)主要集中在500-2800bp之間；指紋圖譜分析結(jié)果為：在遺傳距離為0.18時，測試的