塞來昔布對(duì)人雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞的體外作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:前列腺癌是老年男性常見的惡性腫瘤,目前發(fā)病率和病死率呈逐年增高的趨勢(shì)。該病早期依賴于雄激素的存在,多數(shù)患者對(duì)去勢(shì)或聯(lián)合雄激素阻斷治療有效,但治療數(shù)月或數(shù)年后,腫瘤往往轉(zhuǎn)變成激素抵抗型前列腺癌(hormone-refractory prostate cancer,HRPC)。HRPC是泌尿腫瘤學(xué)中最為復(fù)雜的問題之一,目前世界上尚無有效的治療方法,現(xiàn)在HRPC已成為泌尿外科治療前列腺癌的瓶頸。因而,尋求一種有效的治療方法,對(duì)改善HRP

2、C患者的生活質(zhì)量及延長(zhǎng)生存時(shí)間具有十分重要的意義。近年來,國內(nèi)外很多研究發(fā)現(xiàn)環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)在多種腫瘤中過度表達(dá),且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。進(jìn)一步的研究表明非甾體類抗炎藥(Nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)特別是選擇性COX-2抑制劑對(duì)多種腫瘤均有抑制作用,既可降低腫瘤的發(fā)病率,又可抑制腫瘤復(fù)發(fā)、侵襲與轉(zhuǎn)移。塞來昔布是一種COX-2的選擇

3、性抑制劑,其作為非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥物長(zhǎng)期在臨床上應(yīng)用,近年來國內(nèi)外許多研究表明塞來昔布具有一定的抗腫瘤效用。因此研究塞來昔布對(duì)HRPC的影響及效應(yīng)機(jī)制對(duì)于HRPC的臨床治療有重要的意義。但目前國內(nèi)外有關(guān)COX-2抑制劑對(duì)人前列腺癌的影響的文獻(xiàn)報(bào)道較少見。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)人激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞,觀察塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期分布的影響,以初步探討塞來昔布對(duì)前列腺癌的作用及其抗腫瘤的可能作用機(jī)制,為塞來昔布應(yīng)用

4、于HRPC的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法:體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細(xì)胞,用不同濃度的塞來昔布進(jìn)行干預(yù)。以四甲基偶氮唑藍(lán)(terzolium-based colorimetric assay,MTT)比色法檢測(cè)各濃度、時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的吸光度OD值,推算抑制率;流式細(xì)胞儀測(cè)定塞來昔布對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響;倒置光學(xué)顯微鏡下觀察PC-3細(xì)胞形態(tài)變化;應(yīng)用免疫組化法分析對(duì)凋亡蛋白(Caspase-3)的影響。所得結(jié)果運(yùn)用SPS

5、S13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1 塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞的增殖抑制作用:塞來昔布各濃度組(20、40、80、160μmol/L)作用于PC-3細(xì)胞24h后抑制率分別為9.39％、19.79％、32.46％、53.31％;48h后抑制率分別為12.49％、15.34％、45.33％、61.27％;72h后抑制率分別為16.06％、21.43％、54.33％、81.60％。統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)分析顯示,塞來昔布各濃度組分別作用PC-3細(xì)胞24h、48h、72h后抑制率明顯增加,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)間比較,20μmol/L濃度下,24h、48h、72h的OD值差異無顯著性,其余各時(shí)間點(diǎn)間,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各濃度組間比較,有顯著性差異(P＜0.05)。即在一定濃度范圍內(nèi),塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞有明顯的抑制增殖作用,且呈時(shí)間與劑量依賴性。
　　 2 塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞周期的影響:塞來昔布各濃度組(0μmol/

7、L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)作用于PC-3細(xì)胞48h后,塞來昔布各處理組G0/G1期細(xì)胞比例分別為(26.78±0.89)％、(41.87±0.75)％、(49.25±0.68)％、(62.89±1.07)％;S期細(xì)胞比例分別為(51.86±1.60)％、(44.75±2.82)％、(35.48±1.88)％、(23.48±0.34)％;G2/M期細(xì)胞比例分別為(17.88±1.47)％、(15.65±1

8、.53)％、(12.88±1.59)％、(10.88±0.93)％。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,隨塞來昔布濃度的增加,G0/G1期細(xì)胞明顯增多,S、G2/M期細(xì)胞則明顯減少,細(xì)胞被阻滯于G0/G1期。
　　 3 塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞凋亡的影響:塞來昔布各濃度組(40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L)作用于PC-3細(xì)胞48h后凋亡細(xì)胞明顯增多,凋亡率分別為(12.04±1.64)％、(21.02±2.83)％、(32.68

9、±3.64)％,對(duì)照組凋亡率為(4.86±0.78)％,應(yīng)用單因素方差分析,各濃度組間塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞凋亡率的影響有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4 塞來昔布對(duì)PC-3細(xì)胞Caspase-3表達(dá)的影響:應(yīng)用細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)結(jié)果顯示,塞來昔布濃度為0μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、120μmol/L的各處理組作用PC-3細(xì)胞48h后Caspase-3的相對(duì)表達(dá)量分別為0.17±0.031、0.23±

10、0.042、1.31±0.047、1.39±0.071。隨著塞來昔布濃度的增加,Caspase-3的相對(duì)表達(dá)量逐漸升高,差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 塞來昔布可明顯抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞的生長(zhǎng),在一定范圍內(nèi)呈時(shí)間、劑量依賴性。
　　 2 塞來昔布可影響人前列腺癌PC-3細(xì)胞的細(xì)胞周期。隨著藥物濃度的增大,PC-3細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞數(shù)明顯增多,S和G2/M期細(xì)胞數(shù)減少,細(xì)胞周期阻滯