黃芪聯(lián)合間質干細胞對大鼠缺氧缺血性腦損傷修復作用及兩種不同移植途徑的比較研究.pdf

1、目的：
　　觀察黃芪注射液聯(lián)合大鼠骨髓間質干細胞（rat mesenchymal stem cells,rMSCs）移植以及兩種不同移植途徑對大鼠缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)功能恢復的影響，以促進間質干細胞研究向臨床應用轉化，為間質干細胞早日應用于小兒復雜神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供科學依據(jù)，并為中醫(yī)藥在這一領域的研究和應用進行有益的探索。
　　方法：
　　以Rice方法制作缺氧缺血性腦損傷大鼠模型，按實驗目的不同分兩部分進行。

2、r>　　1.黃芪聯(lián)合rMSCs移植對缺氧缺血性腦損傷大鼠的治療：造模后3d治療組經(jīng)腦局部注射經(jīng)BrdU標記的rMSCs(2.5-5×105cell)，或同時腹腔注射黃芪注射液(1.2ml/100g)，對照組則僅注射黃芪注射液或腦局部注射PBS液。
　　2.兩種不同移植途徑對rMSCs修復缺氧缺血性腦損傷作用的比較研究：造模后3d治療組經(jīng)腦局部注射經(jīng)BrdU標記的rMSCs（2.5-5×105cell）或尾靜脈注射經(jīng)BrdU標記的

3、rMSCs（5-6×106cell）或同時腹腔注射黃芪注射液(1.2ml/100g)，對照組則經(jīng)腦局部或尾靜脈注射PBS液。兩部分大鼠均在造模后24d或移植后21d行Morris水迷宮行為學試驗檢測大鼠學習、記憶能力，進一步取腦組織作HE染色觀察腦損傷病理改變和修復情況，應用雙標免疫組化技術檢測經(jīng)BrdU標記的rMSCs的膠質纖維酸性蛋白（glial fibriallary acidicprotein,GFAP）和神經(jīng)原特異性烯醇化酶（

4、Neuron Specific Enolase，NSE）表達情況。
　　結果：
　　大鼠造模存活率為93.44％。
　　1.黃芪聯(lián)合rMSCs移植對缺氧缺血性腦損傷大鼠的治療：在Morris水迷宮試驗中，腦rMSCs加黃芪組在各時間點的平均潛伏期均低于腦rMSCs組，除第1、6d兩者平均時間無顯著性差異（P＞0.05）外，其余各個時間點均有顯著性差異（P＜0.05）；穿越平臺次數(shù)高于腦rMSCs組，但無顯著性差異（P＞

5、0.05）。腦組織病理切片觀察到腦rMSCs加黃芪組較腦rMSCs組的腦組織水腫和炎性細胞浸潤減輕更明顯，膠質細胞增生更活躍。雙標免疫組化顯示腦rMSCs加黃芪組中GFAP、NSE陽性細胞數(shù)目均較腦rMSCs組增多，并有顯著性差異（P＜0.05）。
　　2.兩種不同移植途徑對rMSCs修復缺氧缺血性腦損傷作用的比較研究：大鼠Morris水迷宮行為學檢測結果示不同移植途徑之間潛伏期平均時間比較，除第1d尾rMSCs組高于腦rMSCs

6、組、尾rMSCs加黃芪組低于腦rMSCs加黃芪組，第5d尾rMSCs組低于腦rMSCs組，且有顯著性差異（P＜0.05）外，其余時間點各組均無顯著性差異（P＞0.05）；腦rMSCs組穿越平臺次數(shù)高于尾rMSCs組，腦rMSCs加黃芪組穿越平臺次數(shù)高于尾rMSCs加黃芪組，但均無顯著性差異（P＞0.05）。腦組織病理切片觀察到兩種移植途徑治療效果相似。雙標免疫組化則顯示兩種移植途徑的大鼠腦組織內都可見BrdU標記的陽性rMSCs存活，并

7、且經(jīng)靜脈移植的細胞分布相對廣泛；腦局部移植的細胞隨著時間的推移不斷遷移；腦rMSCs組GFAP、NSE陽性細胞數(shù)較尾rMSCs組多，但無顯著性差異（P＞0.05）；加用黃芪后腦定位移植途徑的GFAP、NSE陽性細胞數(shù)顯著高于尾rMSCs加黃芪組（P＜0.05）。
　　結論：
　　對大鼠缺氧缺血性腦損傷模型采用黃芪注射液聯(lián)合腦局部 rMSCs移植后，與腦 rMSCs組相比，大鼠的學習、記憶能力有所改善，腦組織病理顯示受損腦組織

8、恢復更明顯，雙標免疫組化顯示GFAP、NSE陽性細胞數(shù)顯著增多，提示黃芪注射液能夠在體內誘導rMSCs向神經(jīng)細胞分化，同時具有協(xié)同MSCs修復損傷腦組織的作用。采用經(jīng)腦定位和靜脈兩種不同rMSCs移植途徑治療缺氧缺血性腦損傷大鼠，比較研究后發(fā)現(xiàn)兩者學習、記憶能力的改善無顯著性差異，病理及雙標免疫組化結果亦無顯著性差異，提示兩種移植途徑具有同樣促進缺氧缺血性腦損傷模型大鼠神經(jīng)損傷恢復的作用，但從臨床實際出發(fā)，尾靜脈途徑更具有臨床應用價值。