五個質(zhì)子泵抑制劑對映體的分離及大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究.pdf

1、手性藥物的生物活性與其立體構(gòu)型密切相關(guān)。目前新藥研究的一個發(fā)展趨勢是研制和生產(chǎn)光學(xué)純的藥物。手性藥物的研究已成為國際新藥研究的方向之一。手性藥物分析在手性藥物研究中作用越來越重要，已成為國際上分析科學(xué)中的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。本文以質(zhì)子泵抑制劑泰妥拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、雷貝拉唑和奧美拉唑?yàn)檠芯繉ο螅⒘藢τ丑w分離測定的毛細(xì)管電泳法和高效液相色譜法，制定了(-)-泰妥拉唑和(-)-泮托拉唑光學(xué)純度的檢測方法，初步研究了泰妥拉唑?qū)τ丑w在大鼠體內(nèi)

2、的立體選擇性藥物動力學(xué)過程，為此類手性藥物的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。 1.毛細(xì)管區(qū)帶電泳法分離四個質(zhì)子泵抑制劑對映體 采用以負(fù)電的磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)為手性選擇劑的毛細(xì)管區(qū)帶電泳法對泰妥拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑和泮托拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行了手性分離研究。考察了環(huán)糊精種類和濃度、背景電解質(zhì)的pH、有機(jī)改性劑種類和濃度等因素對分離的影響。在背景電解質(zhì)為50mmol/L硼砂-150mmol/L磷酸二氫鈉(含40mg/m

3、LSBE-β-CD，pH6.5)，分離電壓為10kV的條件下，四個質(zhì)子泵抑制劑對映體實(shí)現(xiàn)了基線分離。測定了四個質(zhì)子泵抑制劑對映體與SBE-β-CD的結(jié)合常數(shù)，證明了兩對映體與SBE-β-CD結(jié)合常數(shù)的不同是實(shí)現(xiàn)手性分離的主要機(jī)制。對泰妥拉唑?qū)τ丑w的手性分離方法進(jìn)行了方法學(xué)確證，兩對映體濃度在0.65～100μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r2≥0.9994)，兩個對映體的最低檢測限和定量限分別為0.2和0.65μg/mL，方法

4、的日內(nèi)、日間精密度(RSD)均小于3.0％，回收率在91.6～100％之間。該方法應(yīng)用于(-)-泰妥拉唑樣品的對映體過量百分率測定。 2.手性流動相添加劑高效液相色譜法分離泮托拉唑?qū)τ丑w 采用以SBE-β-CD為手性流動相添加劑的高效液相色譜法對泮托拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行手性分離研究?？疾炝薙BE-β-CD的濃度，緩沖溶液的種類、濃度和pH，有機(jī)改性劑的種類和濃度等因素對分離的影響。最后確定分離條件為：在SpherigelC18

5、色譜柱(150mm＋4.6mm，Sμm)上，流動相為10mmol/L磷酸二氫鉀(含20mg/mLSBE-β-CD，pH2.5)-乙腈(85：15，v/v)，流速為0.9mL/min，柱溫為室溫，檢測波長為290nm的條件下，泮托拉唑?qū)τ丑w在15min內(nèi)分離度達(dá)到2.1。按照ICH指導(dǎo)原則對(-)-泮托拉唑中(+)-異構(gòu)體雜質(zhì)的定量測定進(jìn)行方法學(xué)確證，(+)-泮托拉唑的濃度在0.5～6.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r2=0

6、.9991)，(+)-泮托拉唑的檢測限和定量限分別為0.2和0.5μg/mL，方法的日內(nèi)、日間精密度(RSD)小于3.6％，回收率在92.1～101％之間。該方法應(yīng)用于(-)-泮托拉唑原料藥中(+)-泮托拉唑的定量測定。 3.手性配體交換高效液相色譜法分離五個質(zhì)子泵抑制劑對映體． 采用手性配體交換高效液相色譜法對泰妥拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑、雷貝拉唑和奧美拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行手性分離研究?？疾炝伺潴w的種類、配體與金屬離子的比例

7、和濃度、有機(jī)改性劑的種類和濃度、流動相pH等因素對手性分離的影響。在流動相為1mmol/LL-組氨酸，0.5mmol/L醋酸銅(pH7.0)-乙腈(75：25，v/v)，流速1.0mL/min條件下，奧美拉唑，泮托拉唑，雷貝拉唑和蘭索拉唑?qū)崿F(xiàn)基線分離。在上述條件下，將乙腈含量調(diào)整為18％，泰妥拉唑?qū)τ丑w實(shí)現(xiàn)基線分離。應(yīng)用分子模擬構(gòu)建了三元配合物的最低能量構(gòu)型，通過量化計算證明了質(zhì)子泵抑制劑對映體與Cu2+和L-組氨酸形成三元配合物的穩(wěn)定

8、性差異是實(shí)現(xiàn)對映體分離的主要分離機(jī)制。 4.手性固定相高效液相色譜法分離四個質(zhì)子泵抑制劑對映體 應(yīng)用多糖類手性色譜柱ChiralpakAS-H和大環(huán)糖肽抗生素類手性色譜柱ChirobioticV為固定相對泰妥拉唑、泮托拉唑、蘭索拉唑和奧美拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行了手性分離研究。采用ChiralpakAS-H手性固定相時，考察了流動相組成和柱溫對手性分離的影響。在流動相為正己烷-乙醇-三乙胺(20：80：0.1％，v/v/v)，流速

9、為0.4mL/min，柱溫為40℃的條件下，四個質(zhì)子泵抑制劑對映體在15min內(nèi)實(shí)現(xiàn)分離度大于3.3的基線分離?？疾炝舜四Ｊ较滤膫€質(zhì)子泵抑制劑對映體的熱力學(xué)參數(shù)的變化，證明了其與固定相之間的相互作用均是焓控過程。質(zhì)子泵抑制劑與ChiralpakAS-H固定相之間的空間作用是實(shí)現(xiàn)對映體分離的最主要分離機(jī)制。采用ChirobioticV手性固定相時，以泰妥拉唑?yàn)榇?，考察了分離模式、流動相組成和柱溫等因素對分離的影響。在流動相為20mmol

10、/L醋酸銨-四氫呋喃(93：7，v/v，pH6.0)，流速為0.5mL/min，溫度為20℃的條件下，泰妥拉唑?qū)崿F(xiàn)基線分離，其它三個質(zhì)子泵抑制劑對映體得到部分分離?？疾炝舜四Ｊ较绿┩桌驘崃W(xué)參數(shù)的變化，證明了其與固定相之間的相互作用是焓控過程。比較兩種手性固定相的分離結(jié)果，ChiralpakAS-H更適合質(zhì)子泵抑制劑手性藥物對映體的分離。 5.大鼠血漿泰妥拉唑?qū)τ丑w的測定和立體選擇性藥物動力學(xué)初步研究 建立非手性-手性