活性氧組份在姜黃素誘導(dǎo)HL60細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、【背景及目的】
　　姜黃素(Curcumin,CUR)是從姜科姜黃屬植物姜黃的根莖中提取的一個(gè)自然的黃色染料。分子式為C12H36O5，分子量為364.5。它擁有大量的藥理學(xué)活性包括：抗炎、抗氧化、降低膽固醇、抗感染等等[1-3]。姜黃素也在大量的細(xì)胞系[4,5]和動(dòng)物[6,7]中顯示出抗癌變活性。最近研究表明，姜黃素還有可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的功能[8]。越來(lái)越多的證據(jù)顯示，線(xiàn)粒體參與了細(xì)胞凋亡的過(guò)程[9]。由于線(xiàn)粒體在內(nèi)、外線(xiàn)粒

2、體膜之間有一個(gè)線(xiàn)粒體通透性轉(zhuǎn)變孔道(PTP)，許多刺激都可以增加線(xiàn)粒體膜的通透性[10]。線(xiàn)粒體通透性轉(zhuǎn)變孔道(PTP)的打開(kāi)會(huì)導(dǎo)致線(xiàn)粒體膜電位的崩解、呼吸鏈的損傷及ATP合成的抑制。它會(huì)導(dǎo)致凋亡生成因子釋放，最終導(dǎo)致細(xì)胞的死亡[11]。最近有研究表明姜黃素能夠使得AK-5腫瘤細(xì)胞系(一種大鼠的組織細(xì)胞瘤模型)的線(xiàn)粒體膜電位降低[12]。為此，本研究通過(guò)體外培養(yǎng)細(xì)胞模型，研究姜黃素誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的凋亡機(jī)制，為利用姜黃素抗腫瘤的臨床治

3、療提供理論基礎(chǔ)。
　　【材料和方法】
　　體外培養(yǎng)的人急性早幼粒細(xì)胞白血病HL-60細(xì)胞，用含不同濃度的姜黃素的培養(yǎng)基處理24小時(shí)。用倒置相差顯微鏡觀察HL-60細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；用MTT法檢測(cè)姜黃素對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的影響；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位變化，及細(xì)胞活性氧的變化；臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法檢測(cè)姜黃素及NAC共同作用后，HL-60細(xì)胞的生存率；四氮唑藍(lán)(NBT)聚丙烯酰胺凝膠法檢測(cè)Mn-SOD表達(dá)的變化。Western

4、 blot法檢測(cè)抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)的變化。
　　【結(jié)果】
　　1. MTT法檢測(cè)：不同濃度姜黃素(0至100μmol/L)對(duì)人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞均有不同程度的殺傷作用，經(jīng)過(guò)計(jì)算IC50為36.27μmol/L。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)：隨著姜黃素濃度的增加，人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化氫水平逐漸上升。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)：隨著姜黃素濃度的增加，人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞內(nèi)的超氧陰離子

5、水平逐漸上升。
　　4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)：隨著姜黃素濃度的增加，人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞內(nèi)的線(xiàn)粒體膜電位水平逐漸下降。
　　5.臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法檢測(cè)：NAC對(duì)姜黃素誘導(dǎo)人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞的凋亡有保護(hù)性作用。
　　6.NBT凝膠法檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)活性：隨著姜黃素濃度的增加，人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞內(nèi)的Mn-SOD活性明顯增加，Cu/Zn-SOD活性基本沒(méi)變化。
　　7.Western B