實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠肺泡泡沫細(xì)胞比例和功能變化及羅格列酮的影響.pdf

1、肺纖維化的發(fā)病率和病死率逐年增高，發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。肺泡巨噬細(xì)胞在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中起重要作用。以往研究已證實(shí)在肺纖維化形成過程中肺泡巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞增多，但其在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用及機(jī)制尚不清楚。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β 1(transforming growth factor β 1，TGF-β 1)是肺纖維化中研究最深、最重要的細(xì)胞因子，并被認(rèn)為是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的細(xì)胞外基質(zhì)沉積促進(jìn)劑。在多種因素導(dǎo)致的肺纖維化中(包括博萊霉素、環(huán)

2、磷酰胺和射線)均發(fā)現(xiàn)TGF-β 1，含量增高。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connectivetissue growth factor，CTGF)是一種富含半胱氨酸的分泌性多肽，是介導(dǎo)TGF-β1致纖維化作用的重要的下游介質(zhì)，與皮膚、肝、腎等組織器官纖維化有著重要聯(lián)系，但在肺纖維化中的作用研究不多。一氧化氮(NO)與肺纖維化的關(guān)系開始受到重視。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase，iNOS)抑制劑氨基胍

3、能顯著降低肺勻漿中iNOS活性，減少NO釋放，顯著延緩、減輕肺泡炎。在肺內(nèi)NO增多時(shí)，肺內(nèi)iNOS免疫陽性細(xì)胞數(shù)量增多，肺泡巨噬細(xì)胞釋放NO的能力增強(qiáng)。羅格列酮(rosiglitazone，RSG)是過氧化物酶體增生物激活受體γ(peroxisome proliferator-activatedreceptor γ，PPAR γ)的特異性配體。PPAR γ可以調(diào)節(jié)控制脂質(zhì)和糖代謝基因的核受體，其對(duì)泡沫細(xì)胞形成中的作用尚有爭(zhēng)議。

4、本研究用博萊霉素(Bleomycin，BLM)誘導(dǎo)大鼠肺纖維化，并以RSG進(jìn)行干預(yù)，觀察肺泡泡沫細(xì)胞比例的變化，以及肺泡泡沫細(xì)胞較肺泡巨噬細(xì)胞TGF-β 1、CTGF及iNOS表達(dá)的改變，探討泡沫細(xì)胞在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用，以及RSG的影響。 1 肺纖維化大鼠肺泡泡沫細(xì)胞比例的變化及RSG的影響 目的：治療劑量的RSG對(duì)肺纖維化大鼠肺泡泡沫細(xì)胞數(shù)量的影響。 方法 將健康雄性SD大鼠60只分14天、28

5、天兩大組。 14天組4組，每組6只。①sham14組：氣管滴注生理鹽水(normal sodium，NS)0．1ml，次日NS(1ml/d)灌胃14天。②R14組：氣管滴注NS 0．1ml，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。③B+NS14組：氣管滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日NS(1ml/d)灌胃14天。④B+R14組：氣管滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各組于14

6、天后取材。28天組分為6組，每組6只①Sham28組：氣管滴注NS0．1ml，次日NS(1ml/d)灌胃28天。(g)R28組：氣管滴注NS 0．1ml，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。③B+NS28組：氣管滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日NS(1ml/d)灌胃28天。④B+R28組：滴注BLMA<,5> 5mg/kg，次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。⑤B+R14N14組：滴注BLMA<,5> 5mg/kg，

7、次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天，之后NS(1ml/d)灌胃14天。⑥B+N14R14組：滴注BLMAs 5mg/kg，次日14天NS(1ml/d)灌胃14天，之后RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各組于給藥后28d取材。行支氣管肺泡灌洗術(shù)觀察支氣管肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid，BALF)細(xì)胞總數(shù)及油紅O染色法估算BALF中泡沫細(xì)胞的比例。 結(jié)果：BALF中細(xì)胞總數(shù)各RSG組

8、與其對(duì)應(yīng)Sham組相比細(xì)胞數(shù)量無明顯差異(P>0.05)。一次性氣管內(nèi)滴注BLM后，BALF中細(xì)胞總數(shù)增加，且細(xì)胞數(shù)量在肺纖維化炎癥期(滴注BLM 14天后)高于肺纖維化形成期(滴注BLM 28天后)(P<0.01)；給予RSG治療后，BALF中細(xì)胞總數(shù)除B+NS14R14組與模型組無明顯差異外，其余各組均明顯降低(P<0.01)。 油紅O陽性細(xì)胞(即泡沫細(xì)胞)百分率RSG組、模型組、治療組與其sham組相比，油紅O陽性細(xì)胞百分

9、率均顯著增高(P<0.01)。各治療組與其對(duì)應(yīng)的模型組相比，油紅O陽性細(xì)胞百分率均顯著增高(P<0.01)。B+NS14R14組與B+R14NS14組相比，油紅O陽性細(xì)胞百分率率顯著降低(P<0.01)。B+N$28組與B+NS14組相比，油紅O陽性細(xì)胞百分率率顯著降低(P<0.01)。 小結(jié)：在BLM誘導(dǎo)大鼠肺纖維化形成過程中，BALF細(xì)胞總數(shù)增多，泡沫細(xì)胞比例增高。RSG部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多，且RSG增加

10、BALF中泡沫細(xì)胞的比例，其作用在前14天更顯著。 2 泡沫細(xì)胞和巨噬細(xì)胞TGF-β 1、CTGF及iNOS表達(dá)差異及RSG的影響 目的：通過TGF-β 1、CTGF及iNOS在肺泡沫細(xì)胞中表達(dá)的變化的觀察闡述RSG及泡沫細(xì)胞在肺纖維化中的作用。 方法：實(shí)驗(yàn)分組同第一部分。 以油紅O及免疫組織化學(xué)雙重染色法區(qū)別TGF-β 1、CTGF及iNOS在泡沫細(xì)胞與巨噬細(xì)胞表達(dá)差異。 結(jié)果：TGF-β 1免

11、疫組織化學(xué)結(jié)果肺纖維化的前14天表達(dá)TGF-β1細(xì)胞的數(shù)量和比例多于后14天。BALF中表達(dá)TGF-β1的泡沫細(xì)胞比例多于巨噬細(xì)胞。RSG促使巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞使表達(dá)TGF-β1的細(xì)胞比例增加，其作用在前14天更顯著，但由于RSG部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多，使表達(dá)TGF-β1的細(xì)胞數(shù)量減少或無明顯變化。 CTGF免疫組織化學(xué)結(jié)果肺纖維化的前14天表達(dá)CTGF細(xì)胞的比例低于后14天，而表達(dá)CTGF細(xì)胞的數(shù)量高于后1

12、4天。BALF中表達(dá)CTGF的泡沫細(xì)胞比例小于巨噬細(xì)胞。RSG促使巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞且部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多使表達(dá)CTGF的細(xì)胞的數(shù)量和比例減少從而使表達(dá)CTGF細(xì)胞總數(shù)和比例下降且前14天給藥與后14天給藥相比更為明顯。 iNOS免疫組織化學(xué)結(jié)果肺纖維化的前14天表達(dá)iNOS細(xì)胞的比例低于后14天，而表達(dá)iNOS細(xì)胞的數(shù)量高于后14天。BALF中表達(dá)iNOS的泡沫細(xì)胞比例小于巨噬細(xì)胞。RSG促使巨噬細(xì)胞形成

13、泡沫細(xì)胞部分抑制BLM引起的BALF細(xì)胞總數(shù)增多使表達(dá)iNOS的細(xì)胞的數(shù)量和比例減少從而使表達(dá)iNOS細(xì)胞總數(shù)和比例且前14天給藥與后14天給藥相比更為明顯。 小結(jié)：氣管內(nèi)一次性滴注BLM可引起B(yǎng)ALF中細(xì)胞TGF-β1、CTGF以及iNOS表達(dá)上調(diào)。泡沫細(xì)胞表達(dá)iNOS、CTGF數(shù)量及比例低于巨噬細(xì)胞。因而巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的增多可能減輕肺纖維化程度。RSG通過提高BALF中泡沫細(xì)胞的數(shù)量和比例而部分抑制BLM引起的CTGF