干擾素-γ誘導蛋白-10與慢性乙型肝炎肝纖維化發(fā)生發(fā)展相關(guān)性研究.pdf

1、目的:肝纖維化（liver fibrosis，LF）是慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB，CHB)向肝硬化(liver cirrhosis，LC)進展的核心環(huán)節(jié)，有效抗纖維化治療對阻止疾病進展、延緩并降低肝硬化等終末期肝病發(fā)生和病死率至關(guān)重要。因此，及早診斷并動態(tài)評估肝纖維化的進展，尋找肝纖維化發(fā)生發(fā)展的有效預(yù)測指標對臨床制定理想的抗纖維化方案和預(yù)測疾病預(yù)后、轉(zhuǎn)歸均具有重要價值。近年來，趨化因子及其受體研究逐漸成為肝病研

2、究領(lǐng)域熱點，其中干擾素-γ（interferon gamma，IFN-γ）及其誘導蛋白-10（IFN-γinducible protein-10，IP-10）在慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染者不同臨床階段表達存在顯著差異，且影響臨床抗病毒治療應(yīng)答。因此筆者推測，IP-10與CHB患者肝纖維化發(fā)生發(fā)展間也可能存在關(guān)聯(lián)，本研究即通過觀察CHB不同纖維化程度患者血清IFN-γ、 IP-10水平及肝組織IFN

3、-γ、 IP-10 mRNA、蛋白表達，探討IP-10在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用，為臨床肝纖維化無創(chuàng)診斷提供新的思路。
　　方法:收集2009年1月至2010年12月在河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院感染科、邯鄲市傳染病醫(yī)院接受肝穿刺組織病理活檢的CHB患者60例，其中男性35例，女性25例。CHB的診斷符合中華醫(yī)學會感染病學分會、肝病學分會聯(lián)合制定的2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準。另外，依據(jù)2000年版《病毒性肝炎防治方案》中

4、肝纖維化分期標準將全部患者依纖維化程度進行分組，其中S0-1期17例、S2-3期28例、S4期15例，另外選擇同期我院15例健康志愿者血清，15例肝移植供肝組織作為健康對照。
　　所有患者晨起空腹肘靜脈采血，全自動血細胞分析儀檢測全血WBC、PLT;全自動生化分析儀檢測血清ALB、ALT、TB等生化指標;全自動血凝儀檢測PT，并計算PTA、INR等凝血指標;電化學發(fā)光法檢測血清HBsAg、HBeAg定量;Real-time PCR

5、檢測血清HBV DNA水平(下限為500copies/ml)。雙抗體夾心ELISA法檢測血清IFN-γ、IP-10水平;免疫組織化學染色觀察肝組織IFN-γ、 IP-10陽性表達與分布;Real-time PCR檢測肝組織IFN-γ、 IP-10 mRNA表達。
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。HBV DNA進行Log10對數(shù)轉(zhuǎn)換，連續(xù)變量資料以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示。數(shù)據(jù)分析前進行正態(tài)性與方差齊性檢驗。正態(tài)分布

6、且方差齊時，兩組間比較行t檢驗;多組間比較采用One-way ANOVA單因素方差分析，組間比較采用SNK-q檢驗。非正態(tài)分布或方差不齊時，采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H秩和檢驗，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。分類變量采用x2檢驗。相關(guān)性分析采用多因素Logistic回歸分析。按α=0.05水準，雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.各組患者人口基線特征CHB肝纖維化患者60例

7、，年齡18-65歲，平均年齡37±11歲。各組患者在年齡分布、性別比例方面均具有可比性。患者血常規(guī)、凝血功能、肝功能、HBV病毒學等指標比較如表1所示。
　　2.血清IFN-γ、 IP-10水平變化CHB患者血清IFN-γ水平與健康對照組比較呈不同程度升高，尤以S2-3組（5.33±1.17 pg/ml）、S4組（6.17±1.00 pg/ml）升高為著（均P＜0.01），S0-1組（2.63±0.76 pg/ml）與健康對照組（

8、1.98±0.58 pg/ml）比較無統(tǒng)計學差異，S2-3組、S4組血清IFN-γ水平較S0-1組明顯升高（均P＜0.01），且以S4組升高最著。血清IP-10水平變化趨勢與IFN-γ相一致，亦以S2-3組（398.11±95.91 pg/ml）、S4組（482.13±123.90 pg/ml）為著，尤其S4組升高最為明顯，各組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01或P＜0.05）。
　　3.肝組織IFN-γ、IP-10

9、mRNA和蛋白表達差異將健康對照肝組織IFN-γ、IP-10 mRNA表達量設(shè)定為1.00。CHB患者肝內(nèi)IFN-γ、IP-10 mRNA表達均不同程度升高（均P＜0.01），其中S4組（2.90±0.33、4.72±0.95）表達最著，明顯高于S2-3組(2.67±0.34、3.82±0.82)和S0-1組（1.68±0.37、3.31±0.45）（均P＜0.05或P＜0.01）;與S0-1組比較，S2-3組肝內(nèi)IFN-γ、IP-10

10、水平亦明顯升高，兩者比較差異具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01或P＜0.05）。
　　免疫組織化學染色顯示肝組織IFN-γ主要表達于匯管區(qū)淋巴細胞及肝細胞;IP-10則主要表達于炎癥壞死區(qū)及匯管區(qū)周圍肝細胞，部分表達于肝臟浸潤的淋巴細胞。半定量分析顯示，IFN-γ、IP-10蛋白表達變化趨勢與mRNA表達趨勢相一致，以S4組（5.17±1.35，4.00±0.93）表達最著，其后依次為S2-3組（4.91±1.18，3.18±0.80

11、）、S0-1組（3.74±0.76，2.57±0.74）和健康對照組（3.45±0.76，0.05±0.05）。S0-1與健康對照組、S2-3與S4組組間IFN-γ差異無統(tǒng)計學意義，其余各組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）;IP-10則在各組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01或P＜0.05）。
　　4.Logistic回歸分析發(fā)生明顯肝纖維化(S2-4)的預(yù)測因素依據(jù)肝纖維化分期將S2-4期列為明顯肝纖

12、維化，單因素比較顯示輕度纖維化組(S0-1)與明顯肝纖維化組(S2-4)之間有統(tǒng)計學意義的指標為ALB、ALT、TB、PT、PTA、INR、PLT、HBV DNA、IFN-γ與IP-10，共10項。因PTA、INR均由PT計算而得，故將除二者之外的8項指標納入Logistic逐步回歸分析，結(jié)果顯示PLT（OR=11.827，95％ CI為1.415-98.879，P=0.023）、TB(OR=8.469,95％CI為1.154-62.1

13、73, P=0.036)、IP-10(OR=18.070,95％ CI為1.728-188.941，P=0.016)是明顯肝纖維化發(fā)生獨立預(yù)測因素。
　　結(jié)論:
　　1.CHB患者IFN-γ、IP-10水平升高，不同程度肝纖維化IP-10表達存在差異，以肝纖維化程度最重S4期升高最為顯著，提示CHB患者IFN-γ、IP-10水平與肝纖維化程度密切相關(guān)。
　　2.血清及肝組織中IFN-γ、 IP-10水平與肝纖維程度平行